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細胞の不死化に伴い誘導される新しいカルシウム結合蛋白質の解析

细胞永生化诱导的新钙结合蛋白的分析

基本信息

批准号：
02152077
负责人：
遠藤英也
金额：
$ 1.92万
依托单位：
Tottori University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1990
资助国家：
日本
起止时间：
1990 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02152077/
关键词：
Sー100蛋白質カルシウム結合蛋白不死化細胞周期細胞増殖

项目摘要

初代培養細胞は一定の寿命を有しているが、継代を重ねていくと、一部は無限増殖の能力を獲得した、いわゆる不死性の細胞となることが報告されている。これは細胞の増殖機構を解明する上で重要な形質変化と考えられる。我々は分別的ハイブリダイゼ-ション法により、初代培養細胞と比較して、樹立細胞(Balb/C 3T3)で発現が顕著に増加しているmRNAに対するcDNAクロ-ンを4種類分離し、そのなかの1つが、カルシウム結合蛋白質Sー100とhomologyの高い,101個のアミノ酸からなる新しい蛋白質をコ-ドする事を報告した(J.Biochem.103,48ー53,1988)。Sー100カルシウム結合蛋白質はCaイオンの細胞内への流入に際して、細胞内シグナル伝達機構に関与し、DNA合成を促進することが知られている。不死化した細胞でSー100類似の新しい蛋白質が増加していることから、これが細胞の不死化にともなうG_0期からG_1期へ、さらにS期への移行において重要な役割を果している可能性が考えられる。そこで、このクロ-ンを大腸菌での発現ベクタ-に挿入し、この蛋白を大量に発現させ、SDSーPAGEで単一なバンドに精製した。この蛋白は分子量10kDaでpH4.5の等電点をもっており、Ca結合活性が確認された。我々はこの蛋白質をウサギに免疫し、抗体を作成し、細胞の増殖過程におけるこの蛋白質の動態を解析している。更に、このクロ-ンを真核生物発現ベクタ-(SRαプロモ-タ-やメタロチオネインプロモ-タ-)に組込み過剰に発現させ、細胞内へのCaイオンの流入とDNA合成開始との関連を調べ、この蛋白質の機能を解析している。

The primary culture cells have a certain life span, the secondary culture cells have a certain life span, the ability to reproduce indefinitely. The growth mechanism of the cell is important for understanding the quality of the cell. We compare the primary culture cells with the established cells.(Balb/C3T3) has been found to increase the number of mRNA related cDNA fragments and to isolate 4 species, 1 species and 101 novel protein fragments (J. Biochem. 103, 48:53, 1988). S-100-linked proteins are involved in intracellular Ca ~(2 +) influx, intracellular Ca ~(2 +) transfer mechanisms, and DNA synthesis promotion. The possibility of the transformation of the immortal cells from G_0 to G_1 and S to S is examined. The protein was produced in large quantities and purified by SDS PAGE. The protein has a molecular weight of 10kDa, pH 4.5, isoelectric point and Ca binding activity. The protein dynamics in the process of cell proliferation, antibody production, and immune response were analyzed. In addition, the eukaryotic organism develops the protein, the intracellular Ca 2 + influx, the regulation of the initiation of DNA synthesis, and the analysis of the protein function.