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消化管型グルタチオンペルオキシダーゼ遺伝子の導入による細胞の酸化障害の抑制

导入胃肠道谷胱甘肽过氧化物酶基因抑制细胞氧化损伤

基本信息

批准号：
07670183
负责人：
錦見盛光
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Wakayama Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

グルタチオンペルオキシダーゼ(GPx)には4種のアイソザイム(細胞質型、血漿型、リン脂質ヒドロペルオキシド型、消化管型)の存在が知られている。このうち消化管型GPxについては、ヒトのcDNAの塩基配列が明らかにされているが、遺伝子構造の解析がなされていない。本研究においてヒトのcDNAの塩基配列に基づいてその翻訳領域の3′部分をPCR法で増幅し、得られたDNAをハイブリダイゼーションのプローブに用いてCharon4Aで作製されたラットのゲノムDNAライブラリーをスクリーニングし、消化管型GPx遺伝子の独立した2つのクローンを得た。その翻訳領域を含む断片をサブクローニングして塩基配列を決定した結果、ラットとヒトの間で翻訳領域の相同性は89.5%、アミノ酸配列では相同性が93.2%であった。また、消化管型GPx遺伝子は2つのエキソンでコードされ、イントロンは他のGPxのアイソザイムとの間でアミノ酸配列において相同性の高い領域内の同一部位に存在することが分かった。さらに、PCR法によって得たヒトの消化管型GPx遺伝子についても調べ、同様のエキソン/イントロン構造を持つことを確かめた。消化管型GPxのmRNAの3′非翻訳領域には、翻訳の際に活性中心のセレノシスティンを取り込むために必要な共通配列があり、他のGPxで明らかにされたような二次構造を形成することが分かった。次に、消化管型GPxの発現を培養細胞で調べるため、ラット大腸のmRNAを用いて消化管型GPxのcDNAをRT-PCR法で取得して、これを発現ベクターpRc/CMVに導入し、現在ヒト大腸癌培養細胞への導入を試みている。

The existence of four types of protein (GPx)(cytoplasmic, plasma, lipid, and digestive tract) is known. The gene sequence of GPx in the digestive tract was analyzed. In this study, the cDNA gene base alignment of the gene was amplified by PCR, and the DNA sequence was obtained by PCR. Charon 4A was used to prepare the DNA sequence. The results showed that the identity of the domain was 89.5%, and the identity of the base array was 93.2%. In addition, digestive tract GPx gene has two different types of amino acid sequences, one type of amino acid sequence and the other type of amino acid sequence. In addition, PCR method can be used to detect the digestive tract type GPx gene, and the structure of the digestive tract type GPx gene can be determined. The 3 ′ non-inverted domain of the digestive tract GPx mRNA is divided into two parts: one part is the active center and the other part is the secondary structure. In addition, the expression of GPx in cultured cells was regulated by RT-PCR and the cDNA of GPx was obtained by RT-PCR.