肺がんでのヒト第11番染色体長腕上の特異的欠失領域のコスミドを用いたクローニング

点击翻译按钮获取中文摘要

ヒト肺非小細胞がんに関与するがん抑制遺伝子の単離、同定を目的として、ヘテロ接合性の消失を検出し、第11染色体欠失地図を作成した。共通欠失領域4箇所のうち、長腕上のD11S938とD11S939座位に挟まれる遺伝的距離3センチモルガンのq21領域に関し、酵母人工染色体(YAC)クローンの単離を行った。その結果、この領域は4個の酵母人工染色体(YAC)クローン、YAC88H11、YAC939B12、YAC785E12、YAC920H12に分割されて保持されていることを明らかにした。セントロメア側のD11S983座位はYAC88H11に、テロメア側のD11S939座位はYAC920H12に含まれる。これらの座位に挟まれた欠失地図上の共通欠失座位であるD11S1256は、1.7メガ塩基対のヒトDNA断片を持つYAC939B12に含まれることを明らかにした。このクローンの挿入DNAを用いて、コスミドライブラリーを作成し、テロメア側から2クローン、セントロメア側から4クローンを単離し、整列化した。テロメア側クローン79中に、多型性に富むCA繰り返し配列を検出し、新たな多型性マ-マ-86CAとした。86CAをプローブとしたヘテロ接合性の消失の検出により、D11S1256座位を欠失する10個の腫瘍のうち、3個が86CA座位でヘテロ接合性を保持していることを明らかにした。これらの結果、求めるがん抑制遺伝子は、2個のYACにまたがる86CA位置とD11S938座位間の3メガ塩基対以下の領域に存在することを明らかにした。