神経伝達物質放出の分子機構

神经递质释放的分子机制

基本信息

批准号：
07680840
负责人：
阿部輝雄
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Niigata University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07680840/
关键词：
伝達物質放出シナプス小胞膜融合

项目摘要

シナプスにおける伝達物質放出はシナプス小胞とシナプス前膜の融合とそれに続く開口分泌によって起こる。私達を含めて世界のいくつかのグループの最近の研究によってこの過程に直接関与する蛋白質複合体(融合複合体)が同定された。しかし、この複合体の構成蛋白質(syntaxin 1、VAMP/synaptobrevin、SNAP-25、rab3A、synaptotagmin、NSF、SNAPs)間の相互作用とCa2+によるその変化についてはほとんどわかっていない。本研究において私達はこの複合体の成分として私達自身が発見した19a蛋白質を追究し、その本体を明らかにした。単クローン抗体SPM-1を用いて融合複合体を精製し、電気泳動によって19a成分を単離した後、CNBr分解した。得られたペプチドを電気泳動にて分離し、蛋白質シークエンサーによってその部分アミノ酸配列を決定した。PCRによって得られたこの配列に対するヌクレオチドをプローブにしてウシ脳cDNA libraryをスクリーニングし、19a蛋白質に対するcDNAをクローニングした。19a蛋白質(synaphinと命名)は従来知られていなかった新規蛋白質で、グルタミン酸とリジンに富み、膜貫通部位等の疎水性部位は全く存在しない。上記の部分アミノ酸配列に対するペプチドを合成して、19a蛋白質に対する抗体を作製した。この抗体を用いたイムノブロットによる解析の結果、この蛋白質はほとんどが、細胞質に存在すること、また、神経系に局在することが判明した。したがって、synaphinは融合複合体に結合およびそこから解離すると推測される。ラット脳のcDNA libraryの解析により、一次構造が互いにきわめてにているsynaphinlと2が同定された。これらは異なった遺伝子を由来するものと考えられる。現在、この2種の蛋白質と融合複合体の他の成分との相互作用を詳細に検討中である。

突触处的发射器释放是通过突触囊泡和突触前膜的融合而发生的。来自包括美国在内的世界几个小组的最新研究已经确定了直接参与此过程的蛋白质复合物（融合络合物）。然而，对于这种复合物的组成蛋白之间的相互作用知之甚少（语法1，VAMP/SNAPTOBREVIN，SNAP-25，rab3a，rab3a，Synaptotagmin，nsf，nsf，snaps）及其由于Ca2+而变化。在这项研究中，我们寻求19A蛋白，作为该复合物的一个组成部分，并揭示了其主体。使用单克隆抗体SPM-1纯化融合络合物，并通过电泳分离19a成分，然后分离出CNBR降解。通过电泳分离所得的肽，并通过蛋白质测序仪确定部分氨基酸序列。使用PCR作为探针获得的该序列筛选牛脑cDNA文库，并克隆19a蛋白的cDNA。 19A蛋白（命名为突发蛋白）是一种新的蛋白质，以前尚不清楚，富含谷氨酸和赖氨酸，并且没有任何疏水位点，例如跨膜位点。在上面的部分氨基酸序列中合成了针对19a蛋白的抗体。使用这种抗体使用免疫印迹的分析表明，大多数蛋白质都存在于细胞质中，并且位于神经系统中。因此，假定synaphen与融合复合物结合并解离。大鼠脑cDNA文库的分析确定了突触和2，它们具有极其主要的结构。这些被认为是源自不同基因的。当前，正在详细研究这两种蛋白质与融合络合物的其他成分之间的相互作用。