大腸菌がD体のアミノ酸を単一炭素源として利用する!

大肠杆菌使用 D-氨基酸作为单一碳源！

• 批准号: 14656032
• 负责人: 小林 達彦
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: University of Tsukuba
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14656032/
• 关键词: D-アミノ酸; D-システイン; 酵素; 発現

昨年度までに、(D-アミノ酸ラセマーゼ,D-アミノ酸トランスアミナーゼ,D-アミノ酸オキシダーゼを含む)既知のD-アミノ酸代謝酵素遺伝子とは全く相同性を示さない、新規な酵素がD-アミノ酸代謝に関わっていること明らかにした。大腸菌ゲノムデータベース上でo341#16と登録されている遺伝子が本資化能に関与しているが、予想される開始コドンより32アミノ酸下流のメチオニンがN末端アミノ酸であると同定した。そこで、本メチオニンに対応するコドンを基に新たにデザインした合成オリゴヌクレオチド(と、終止コドン下流の塩基配列を基にデザインした合成オリゴヌクレオチド)を用いてPCR法によって増幅した遺伝子の大腸菌JM109での発現をSDS-ポリアクリルアミドゲル電気泳動で検討した結果、全可溶住タンパク質の40%もの著量発現が認められた。本発現産物を用いて、D-シスチン分解酵素活性を測定した結果、顕著な活性を示すことが明らかとなった。また、分解産物として、ピルビン酸、アンモニア、硫化水素を同定することに成功し、本発現産物はD-シスチンデスルフヒドラーゼであることが判明した。続いて、本酵素をDEAE-Sephacel、Mono-Qカラムクロマトグラフィーに供することによって、電気泳動的に単一に単離精製することに成功した。本酵素の分子量は72,000であり、分子量35,000のサブユニット2個から構成されることが明らかとなった。本酵素のD-シスチンに対するKm値は1.07mMであり、Vmaxは9.32μmol/min/mgであることが判明した。また、本酵素はD-システインにも作用し、そのKm値は0.87mMであり、Vmaxは4.51μmol/min/mgであった。さらに、本酵素は逆反応をも行うことが判明した。

Last year, it was known that the acid substituted enzymes were homologous, and that the new enzyme D-lactamase showed the same level of homogeneity. Please contact us at the end of the day. Please contact us at the end of the day. If you want to start the operation, you will need to register the same information as you would like to start. In this paper, we use the method of PCR to detect the results of the electrophoretic swimming exercise in the SDS- environment, which is based on the analysis of the results of the laboratory test, the synthesis of the new equipment, the synthesis of the basic equipment, the synthesis of the substrate, the synthesis of the drug, and the results of the swimming exercise. It's all soluble. 40% of the weight is high. The results of the determination of the activity of decomposing enzymes in the present compound were determined by using the enzyme activity assay, and the results were shown by the activity test. The contents of the compound, decomposed substance, acid, sulfide, sulfide, water sulfide, water sulfide, sulfide, sulfide, This enzyme DEAE-Sephacel, this enzyme DEAE-Sephacel, this enzyme, the enzyme, the enzyme and the enzyme. This enzyme has a molecular weight of 72000 and a molecular weight of 35000. The enzyme is divided into two groups. This enzyme is sensitive to Km, 1.07mM, and Vmax, 9.32 umol

项目成果

Oinuma, K-I. et al.: "Novel aldoxime dehydratase involved in carbon-nitrogen triple bond synthesis of pseudomonas chlororaphis B23 : Sequencing, gene expression purification and characterization"J.Biol.Chem.. 278. 29600-29608 (2003)

大沼，K-I。

Kojima, Y. et al.: "A novel lipase from pseudomonas fluorescens HU380 : Gene cloning, overproduction, renaturation-activation, two-step purification and characterization"J.Biosci.Bioeng.. 96. 242-249 (2003)

Kojima, Y. 等人：“来自荧光假单胞菌 HU380 的新型脂肪酶：基因克隆、过量生产、复性-激活、两步纯化和表征”J.Biosci.Bioeng.. 96. 242-249 (2003)

Higashibata, H. et al.: "Surface histidine residue of archaeal histone affects DNA compaction and thermostability"FEMS.Microbiol.Lett.. 224. 17-22 (2003)

Higashibata, H. 等人：“古菌组蛋白的表面组氨酸残基影响 DNA 压缩和热稳定性”FEMS.Microbiol.Lett.. 224. 17-22 (2003)

Higashibata, H.et al.: "Helicase and nuclease activities of hyperthermophile pyrococcus horikoshii Dna2 inhibited by substrates with RNA Segments at 5'-end"J.Biol.chem. 278. 15983-15990 (2003)

Higashibata, H.等人：“超嗜热菌热球菌 Dna2 的解旋酶和核酸酶活性受到 5 端 RNA 片段底物的抑制”J.Biol.chem。

Higashibata, H., et al.: "Helicase and Nuclease Activities of Hyperthermophile Pyrococcus horikoshii Dna2 Inhibited by Substrates with RNA Segments at 5'-End"J. Biol. Chem.. (印刷中). (2003)

Higashibata, H. 等人：“5 端带有 RNA 片段的底物抑制嗜热热球菌 Dna2 的解旋酶和核酸酶活性”J. Biol。