微生物酵素の新規活性化機構の解析

微生物酶的新型激活机制分析

• 批准号: 21658026
• 负责人: 小林 達彦
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: University of Tsukuba
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
• 财政年份: 2009
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2009 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21658026/
• 关键词: ニトリル; 代謝; 微生物; 酵素

Nitrile hydratase(以下、NHase)を対象として、本申請者らはこれまでに例のない新規かつユニークな翻訳後活性化機構を発見し"Self-Subunit Swapping"と命名した。本研究では、"Self-Subunit Swapping"で最も重要な役割を果たす"Self-Subunit Swapping"シャペロンタンパク質複合体の機能および翻訳後修飾機構の詳細を解明することを目的とした。Nh1Eタンパク質(以下、eタンパク質)と。(Coイオンを含まない)αサブユニットから構成される複合体αe_2(アポαe_2)にin vitroでCo添加するとCoが取り込まれることを発見した。そこで、アポαe_2から"Coイオンを持たないαサブユニット"と"eタンパク質"をそれぞれ分離・精製した。"Coイオンを持たないαサブユニット"にin vitroでCo添加してもCoが取り込まれなかったが、さらに"eタンパク質"を添加すると"Coイオンを持たないαサブユニット"にはCoが取り込まれた。即ち、αサブユニットへのCoの取り込みは"eタンパク質"依存的であり、この時、"eタンパク質"は、「タンパク質へのCoの挿入」に関与していることから、金属シャペロンとして機能することが示唆された。また、アポαe_2にCoが取り込まれたαe_2を精製し、トリプシン消化後MALDI-TOS/MS解析により、αサブユニットのシステイン残基を調べた結果、翻訳後酸化修飾されていることを実証した。この時、"eタンパク質"は、「システイン残基の酸化」に関与していることから、酸化反応の触媒、すなわち酵素として機能することが示唆された。すなわち、「"Self-Subunit Swapping"シャペロン」として機能するeタンパク質が、「金属シャペロン」、「酸化反応触媒」の新たな2つの機能を持つことを新たに発見した。

Nitrile hydratase (" を, NHase) like と seaborne し て, this applicant ら は こ れ ま で に example の な い new rules か つ ユ ニ ー ク な turn after 訳 activeness institutions を 発 see し "Self - Subunit Swapping" と named し た. , this study で は "Self - Subunit Swapping" で も most important な "を cut fruit た す" Self - Subunit Swapping "シ ャ ペ ロ ン タ ン パ ク quality, and the function of complex の お よ び modification after turn 訳 institutions の を explain in detail す る こ と を purpose と し た. Nh1Eタ タ パ パ (hereinafter, eタ パ パ)と. Contains (Co イ オ ン を ま な い) alpha サ ブ ユ ニ ッ ト か ら constitute さ れ る complex alpha e_2 (ア ポ alpha e_2) に in vitro で Co add す る と Co が take り 込 ま れ る こ と を 発 see し た. そ こ で, ア ポ alpha e_2 か ら "Co イ オ ン を hold た な い alpha サ ブ ユ ニ ッ ト" と "e タ ン パ ク mass" を そ れ ぞ れ separated, refined し た." Co イ オ ン を hold た な い alpha サ ブ ユ ニ ッ ト "に in vitro で Co add し て も Co が take り 込 ま れ な か っ た が, さ ら に" e タ ン パ ク qualitative add す "を る と" Co イ オ ン を hold た な い alpha サ ブ ユ ニ ッ ト "に は Co が take り 込 ま れ た. Namely ち, alpha サ ブ ユ ニ ッ ト へ の Co の take り 込 み は "e タ ン パ ク mass" dependent で あ り, こ の, "e タ ン パ ク mass" は, "タ ン パ ク qualitative へ の Co の scions into" に masato and し て い る こ と か ら, metal シ ャ ペ ロ ン と し て function す る こ と が in stopping さ れ た. ま た, ア ポ alpha e_2 に Co が take り 込 ま れ た alpha e_2 を refined し, ト リ プ シ ン after digestion MALDI - TOS/MS analytical に よ り, alpha サ ブ ユ ニ ッ ト の シ ス テ イ ン residues を adjustable べ た results, after turn 訳 acidification modification さ れ て い る こ と を card be し た. こ の, "e タ ン パ ク mass" は, "シ ス テ イ ン residues の acidification" に masato and し て い る こ と か ら, acidification 応 の catalyst, す な わ ち enzyme と し て function す る こ と が in stopping さ れ た. す な わ ち, "" Self - Subunit Swapping" シ ャ ペ ロ ン "と し て function す る e タ ン パ ク が," metal シ ャ ペ ロ ン ", "acidification 応 catalyst" の new た な 2 つ の function を hold つ こ と を new た に 発 see し た.

项目成果

ニトリルヒドラターゼの新しい成熟化機構の発見

腈水合酶成熟新机制的发现

• 发表时间: 2010
• 期刊: バイオサイエンスとインダストリー 65
• 作者: 橋本義輝;小林達彦
• 通讯作者: 小林達彦

"Self-Subunit Swapping"に関わるChaperoneタンパク質の新たな機能

伴侣蛋白参与“自亚基交换”的新功能

• 发表时间: 2009
• 作者: 橋本義輝;周哲敏;小林達彦
• 通讯作者: 小林達彦

Rhodococcus rhodochrous J1菌由来L-Nhaseの翻訳後成熟化に関する研究

红红球菌 J1 来源的 L-Nhase 翻译后成熟研究

• 发表时间: 2009
• 作者: 周哲敏;橋本義輝;小林達彦
• 通讯作者: 小林達彦

放線菌におけるニトリル関連化合物代謝の応用酵素学的研究

放线菌中腈相关化合物代谢的应用酶学研究

• 发表时间: 2009
• 作者: 橋本義輝;周哲敏;小林達彦;小林達彦
• 通讯作者: 小林達彦

"Self-Subunit Swapping"シャペロンの新たな2つの機能

“自子基交换”伴侣的两个新特征

• 发表时间: 2010
• 作者: 橋本義輝;周哲敏;小林達彦
• 通讯作者: 小林達彦