ニトリル代謝関連酵素群の分子機能解析と有用物質生産への利用

与腈代谢相关的酶的分子功能分析及其在有用物质生产中的应用

• 批准号: 23248013
• 负责人: 小林 達彦
• 金额: $ 11.73万
• 依托单位: University of Tsukuba
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (A)
• 财政年份: 2011
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2011 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-23248013/
• 关键词: ニトリル; 代謝; 酵素; 精製

平成23年4月に基盤研究(A)に採択され研究を開始したが、本年3月11日の震災により研究機器類や実験試料に被害を受け、研究開始の4月には充分な研究環境が整わない状況であった。さらに、基盤研究(S)の採択通知(平成23年5月31日内定)受けたことから、本基盤研究(A)は今年初めて採択されてから2ヶ月にも満たない研究期間で辞退せざるを得なかった。従って、以下の成果しか得られていない。他のニトリルヒドラターゼ(NHase)の活性中心部分の立体構造解析を参考に、Rhodococcus rhodochrous J1株の低分子量型ニトリルヒドラターゼ(L-NHase)の(αサブユニットの)コバルトに配位している2つの酸化システイン残基(システインスルフィン酸とシステインスルフェン酸)とβサブユニットの2つのアルギニン残基との間で各々塩橋を形成する静電引力が、Self-Subunit Swappingが起こる駆動力として重要であることを極く最近、本申請者らは解明した。しかし、NHaseの構造からだけでは、αサブユニットと(Self-Subunit Swappingシャペロンの)eタンパク質が複合体中でどのような構造をとっているかは不明であり、構造学的見地からSelf-Subunit Swappingを解明するために、本複合体および複合体が直接作用するL-NHaseの立体構造解析を行うことを目的として実験を行った。結晶化に必要な十分量の複合体とL-NHaseを調製するために、L-NHaseのαβ両サブユニットおよびeタンパク質の構造遺伝子を導入したRhodococcus属形質転換体を調製後、大量培養を行った。得られた菌体を破砕後、各種クロマトグラフィーを利用して複合体とL-NHaseの精製を行った。

In April 2013, the base plate research (A) was started. On March 11, 2013, the earthquake disaster occurred. The research equipment and test materials were damaged. In April 2013, the research was started. The environment was fully studied. Notice of acquisition of base plate research (S)(scheduled on May 31, 2013) The following results were obtained. Analysis of the stereostructure of the active center of NHase Low Molecular Weight Type of Rhodococcus rhodochrous J1 Strain (L-NHase)(α-Subunit Swapping) 2-Amino acid residues (α-Subunit Swapping) 3-Amino acid residues (α- The structural analysis of NHase is carried out for the purpose of direct interaction between L-NHase and the complex. Crystallization of the necessary amount of the complex and L-NHase modulation, L-NHase αβAfter the bacteria are broken, all kinds of bacteria are used to purify L-NHase.