Wntシグナル制御による胚幹(ES)細胞からの造血幹細胞誘導の試み

尝试通过Wnt信号控制从胚胎干（ES）细胞诱导造血干细胞

基本信息

批准号：
14657246
负责人：
平尾敦
金额：
$ 1.79万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14657246/
关键词：
ES細胞 Wnt βカテニン造血幹細胞

项目摘要

Wnt/βカテニンのシグナルは、個体の発生及び分化に必須の重要な役割を担うことが示されてきた。本研究ではES細胞を用い、未分化性の維持機構におけるWnt/βカテニンの役割を明らかにする、さらに造血幹細胞の自己複製での役割を解明することを目的とした。本年度は、βカテニンのコンディショナルノックアウトES細胞を作製することを試みた。Targeting Vectorは、熊本大学、永渕昭良教授より供与された。このVectorは、マウスβカテニンのすべてのエクソンを取り除き、そのかわりにβカテニンcDNAが挿入できる。その後、Cre loxPを用いてcDNAを取り除き、その時点でES細胞において、ノックアウトされることになる。まず、ES細胞に電気穿孔法により導入し、現在、Hygromycin耐性クローンの中から、相同組み換え体を得た。現在、もう一方のアレルを相同組換えされたESを得ることを試みている。最近Wnt/βカテニンが、ES細胞の未分化性の維持に重要なことが明らかとなった。さらに、その下流でホメオボックス遺伝子Nanogが機能している。我々は、Nanogが、造血幹細胞に発現していることを明らかにした。このことは、造血幹細胞でも、ESと同様の機構で未分化性が保たれていることが示唆された。さらに、栄養除去時の細胞死に影響があることも明らかにした。

Wnt/β-catenin的信号已被证明在个体发展和分化中起着重要而重要的作用。在这项研究中，我们使用ES细胞来阐明Wnt/β-catenin在不体分化的维持机制中的作用，并进一步阐明造血干细胞在自我更新中的作用。今年，我们试图生成β-catenin的条件基因敲除ES细胞。靶向载体由库曼本大学的Nagabuchi Akiyoshi教授提供。该载体去除所有小鼠β-catenin的外显子，并可以插入β-catenin cDNA。然后使用CRE LOXP除去cDNA，此时将其在ES细胞中拆除。首先，通过电穿孔将细胞引入ES细胞，并从当前耐毒素的克隆中获得同源重组。目前，我们正在尝试获得其他等位基因的同源重组。最近，已经揭示了Wnt/β-catenin对于维持未分化的ES细胞很重要。此外，同型基因基因Nanog在下游发挥作用。我们已经揭示了纳米在造血干细胞中表达。这表明造血干细胞仍然没有与ES相似的机制分化。此外，发现它在去除营养物质后会影响细胞死亡。