発生工学的手法を用いた前駆脂胞細胞の単離同定の試み

尝试使用发育工程技术分离和鉴定脂肪祖细胞

• 批准号: 14657271
• 负责人: 小川 佳宏
• 金额: $ 2.05万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14657271/
• 关键词: 前駆脂肪細胞; FGF10; 遺伝子; クローン; ドットブロット; 増殖; 分化

本研究では、FGF10(fibroblast growth factor 10)の前駆脂肪細胞増殖・分化調節作用の分子機構を明らかにするために、前駆脂肪細胞においてFGF10により発現が変化する遺伝子群の探索を試みた。3T3-L1前駆脂肪細胞にFGF10あるいは溶媒のみを添加し、添加30分後に細胞を回収してpolyA^+RNAを抽出した。このpolyA^+RNAを用い、PCR-セレクトcDNAサブトラクション法にて、前駆脂肪細胞においてFGF10により発現が変化する遺伝子群の同定を試みた。得られた遺伝子群から陽性クローンを得るために、FGF10添加および非添加群より作製したcDNAライブラリーをプローブとしてドットブロットを行った。FGF10を添加した3T3-L1前駆脂肪細胞より抽出したRNAをtester、FGF10非添加群より抽出したRNAをdriverとしてPCR-サブトラクティブハイブリダイゼーション法を施行し、1,300の陽性クローンを得た。これらのクローンをFGF10添加および非添加群より作製したcDNAライブラリーをプローブとしてドットブロットを行い、38個の陽性クローンを得た。これらのうちFGF10による発現増強効果の高いものについて、サンガー法にて塩基配列を決定した。今回、RNA-binding motif protein 3、biglycan、carnitine palmitoyl transferase等の既知遺伝子が得られた。本研究において同定された遺伝子群は脂肪細胞の増殖・分化におけるFGF10の作用メカニズムを解明する上で新しい手がかりとなり、前駆脂肪細胞の単離同定のためにも有用な情報を与えると考えられた。

In this study, the molecular mechanism of differentiation and differentiation of adipose cells in FGF10 (fibroblast growth factor 10) was demonstrated by molecular mechanism, and that of adipose cells in preadipose tissue (FGF10) was detected in this study. Before 3T3-L1, the fat cell was FGF10, and the solvent was added. After adding 30 minutes, the fat cell was returned to polyA ^ + RNA extract. Multiple polyA ^ + RNA is used, PCR- is used, cDNA is used, and the previous fat cell is known as adipose tissue. The subgroup of adipose tissue is the same as that of the test group. The sub-group is divided into several subgroups, and the FGF10 is added as a non-additive group, which is called "cDNA" and "non-additive group". FGF10 added fat cells before 3T3-L1, extracted RNA tester, FGF10 non-additive group extracted RNA, driver, PCR-, fat cells, RNA, driver, fat, RNA, driver, PCR-, fat, fat, fat, Please add a non-additive group to the FGF10 to make sure that you are not adding a group of users. You can do the same thing as a non-additive group. You can do a lot of things. You need to know how to do this. You need to know how to do this. In order to improve the performance of the FGF10, the results show that the system is based on the basis of the decision. This time, RNA-binding motif protein 3, biglycan, carnitine palmitoyl transferase and other "known" children get a lot of money. In this study, we found that the subgroup of adipose cells, the differentiation of fat cells, the effect of FGF10, the function of lipopolysaccharide, the new hand, the former adipose cells, the useful ones, and the others.

项目成果

T.Nakagawa et al.: "Antiobesity and antidiabetic effects of brain-derived neurotrophic factor in rodent models of leptin resistance"Int. J. Obes.. (in press). (2003)

T.Nakakawa 等人：“脑源性神经营养因子在瘦素抵抗啮齿动物模型中的抗肥胖和抗糖尿病作用”Int。

Y.Ogawa et al.: "Pathophysiogical role of leptin in lifestyle-related diseases : studies with transgenic skinny mice overexpressing leptin"J. Diabetes Complications. 16. 119-122 (2002)

Y.Okawa 等人：“瘦素在生活方式相关疾病中的病理生理作用：过度表达瘦素的转基因瘦小鼠的研究”J.

T.Miyawaki et al.: "Clinical implications of leptin and its potential humoral regulators in long-term low-calorie diet therapy for obese humans."Eur.J.Clin.Nutr.. 56. 593-600 (2002)

T.Miyawaki 等人：“瘦素及其潜在体液调节剂在肥胖人群长期低热量饮食治疗中的临床意义。”Eur.J.Clin.Nutr.. 56. 593-600 (2002)

H.Kobayashi et al.: "A novel homozygous missense mutation of melanocortin-4 receptor (MC4R) in a Japanese woman with severe obesity"Diabetes. 51. 243-246 (2002)

H.Kobayashi 等人：“患有严重肥胖的日本女性中黑皮质素 4 受体 (MC4R) 的新型纯合错义突变”糖尿病。