発生工学的手法を用いた前駆脂胞細胞の単離同定の試み

尝试使用发育工程技术分离和鉴定脂肪祖细胞

• 批准号: 14657271
• 负责人: 小川 佳宏
• 金额: $ 2.05万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14657271/
• 关键词: 前駆脂肪細胞; FGF10; 遺伝子; クローン; ドットブロット; 増殖; 分化

本研究では、FGF10(fibroblast growth factor 10)の前駆脂肪細胞増殖・分化調節作用の分子機構を明らかにするために、前駆脂肪細胞においてFGF10により発現が変化する遺伝子群の探索を試みた。3T3-L1前駆脂肪細胞にFGF10あるいは溶媒のみを添加し、添加30分後に細胞を回収してpolyA^+RNAを抽出した。このpolyA^+RNAを用い、PCR-セレクトcDNAサブトラクション法にて、前駆脂肪細胞においてFGF10により発現が変化する遺伝子群の同定を試みた。得られた遺伝子群から陽性クローンを得るために、FGF10添加および非添加群より作製したcDNAライブラリーをプローブとしてドットブロットを行った。FGF10を添加した3T3-L1前駆脂肪細胞より抽出したRNAをtester、FGF10非添加群より抽出したRNAをdriverとしてPCR-サブトラクティブハイブリダイゼーション法を施行し、1,300の陽性クローンを得た。これらのクローンをFGF10添加および非添加群より作製したcDNAライブラリーをプローブとしてドットブロットを行い、38個の陽性クローンを得た。これらのうちFGF10による発現増強効果の高いものについて、サンガー法にて塩基配列を決定した。今回、RNA-binding motif protein 3、biglycan、carnitine palmitoyl transferase等の既知遺伝子が得られた。本研究において同定された遺伝子群は脂肪細胞の増殖・分化におけるFGF10の作用メカニズムを解明する上で新しい手がかりとなり、前駆脂肪細胞の単離同定のためにも有用な情報を与えると考えられた。

This study で は, FGF10 (fibroblast growth factor 10) の 駆 fat cells raised before colonization, differentiated regulation の molecular institutions を Ming ら か に す る た め に, former 駆 fat cells に お い て FGF10 に よ り 発 が now - the す る heritage 伝 subgroup の try to explore を み た. 駆 fat cells before 3 t3 - L1 に FGF10 あ る い は solvent の み を を に cells after add し, add 30 points back to 収 し て polyA を ^ + RNA extraction し た. こ の polyA ^ + RNA を い, PCR - セ レ ク ト cDNA サ ブ ト ラ ク シ ョ ン method に て, former 駆 fat cells に お い て FGF10 に よ り 発 が now - the す る heritage 伝 subgroup の with fixed を try み た. Have ら れ た heritage 伝 subgroup か ら positive ク ロ ー ン を must る た め に, FGF10 add お よ び not add group よ り cropping し た cDNA ラ イ ブ ラ リ ー を プ ロ ー ブ と し て ド ッ ト ブ ロ ッ ト を line っ た. FGF10 を add し た 駆 fat cells before 3 t3 - L1 よ り spare し た RNA を tester, FGF10 not add group よ り spare し た RNA を driver と し て PCR - サ ブ ト ラ ク テ ィ ブ ハ イ ブ リ ダ イ ゼ ー シ ョ ン し を, 1300 の positive ク ロ ー ン を た. こ れ ら の ク ロ ー ン を FGF10 add お よ び not add group よ り cropping し た cDNA ラ イ ブ ラ リ ー を プ ロ ー ブ と し て ド ッ ト ブ ロ ッ ト を い, 38 の positive ク ロ ー ン を た. こ れ ら の う ち FGF10 に よ る 発 now raised strong working high の い も の に つ い て, サ ン ガ ー method に て salt base with column を decided し た. This time, RNA-binding motif protein 3, biglycan, carnitine palmitoyl transferase, etc. are already known to have 伝 offspring が and られた. This study に お い て with fixed さ れ た heritage 伝 subgroup は fat cells の raised colonization, differentiation に お け る FGF10 の role メ カ ニ ズ ム を interpret す る で new し い hand が か り と な り, former 駆 fat cells の 単 from be の た め に も な useful intelligence を and え る と exam え ら れ た.

项目成果

T.Nakagawa et al.: "Antiobesity and antidiabetic effects of brain-derived neurotrophic factor in rodent models of leptin resistance"Int. J. Obes.. (in press). (2003)

T.Nakakawa 等人：“脑源性神经营养因子在瘦素抵抗啮齿动物模型中的抗肥胖和抗糖尿病作用”Int。

Y.Ogawa et al.: "Pathophysiogical role of leptin in lifestyle-related diseases : studies with transgenic skinny mice overexpressing leptin"J. Diabetes Complications. 16. 119-122 (2002)

Y.Okawa 等人：“瘦素在生活方式相关疾病中的病理生理作用：过度表达瘦素的转基因瘦小鼠的研究”J.

T.Miyawaki et al.: "Clinical implications of leptin and its potential humoral regulators in long-term low-calorie diet therapy for obese humans."Eur.J.Clin.Nutr.. 56. 593-600 (2002)

T.Miyawaki 等人：“瘦素及其潜在体液调节剂在肥胖人群长期低热量饮食治疗中的临床意义。”Eur.J.Clin.Nutr.. 56. 593-600 (2002)

H.Kobayashi et al.: "A novel homozygous missense mutation of melanocortin-4 receptor (MC4R) in a Japanese woman with severe obesity"Diabetes. 51. 243-246 (2002)

H.Kobayashi 等人：“患有严重肥胖的日本女性中黑皮质素 4 受体 (MC4R) 的新型纯合错义突变”糖尿病。