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新しいトランスジェニック魚を用いた網膜生理学研究の展開

利用新型转基因鱼开展视网膜生理学研究

基本信息

批准号：
14658267
负责人：
加藤聖
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Kanazawa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

魚は哺乳類と異なり中枢神経軸索の損傷を受けても再生する。我々は視神経をモデルとして魚類の神経両生分子をクローニングし、プルプリン、トランスグルタミネース等をクローニングした。これら分子のcDNA全長を得、まずプラスミドに組み込み大腸菌にトランスフェクションし(1)リコンビナント蛋白を精製した。(2)この蛋白からペプチド抗体やウサギに免疫し抗体を作製した。(3)更に標的遺伝子特異的なRNAiを行なうためsiRNA用のプライマーを設計した。ルシフェラーゼ遺伝子をレポーターとして、標的遺伝子のルシフェラーゼ活性を指標に遺伝子発現の抑制量より適するプライマーを取得した。網膜組織培養切片を用いて神経突起の伸長(神経の再生)を見た所、プルプリンやトランスグルタミネースのリコンビナント蛋白の添加により著明な神経突起の伸長が見られた。逆に抗体の添加により神経突起の伸長が抑えられた。また、リポフェクタミン2000の共存下にsiRNAを添加したところ、ランダムプライマーによるmock実験と比べて著明に神経突起の伸展が抑制された。以上の結果より、見つかったプルプリン、トランスグルタミネースが網膜の神経節細胞の軸索伸長(視神経の再生)に大きく関わっていることが判明した。現在、ウィルスベクターによる過剰発現の影響と哺乳類網膜への導入実験を行っている。この様に魚で得られた遺伝子の導入や抑制実験により新しい網膜での機能が明らかにされた。

The central god of the mammalian animal is suffering from the disease of rebirth. We don't know how to make sure that we don't know what to do. We don't know what to do. We don't know if there's anything wrong with you. The whole length of molecular cDNA was obtained, and the bacteria were isolated from the bacteria. (1) the protein was purified and purified. (2) the antibody was detected by immunizing the antibody. (3) the more recent RNAi sub-feature sets the siRNA by using the custom custom device. This means that the amount of inhibition that can be detected is the amount of inhibition that can be seen. The tissue culture section of the network tissue is used to elongate the protuberance (regeneration) of the tissue of the network, and to add the protuberance of the protuberance to the protuberance of the brain. The reverse antibody was added and the protuberances were elongated and suppressed. Under the coexistence of "siRNA" and "2000", add the "stretch" and "suppress" of the "siRNA", and "stretch" and "suppress" the protuberance. The results of the above results show that the growth of the cell of the network network is very important. At present, there is a significant impact on the registration of mammalian networks in the Internet market. This will enable you to learn that the new network networking machine will be able to learn how to learn how to do so.