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飼育室排気系ダストを用いた実験動物ウイルスゲノムの新リアルタイム検出法の開発

利用动物房排气系统粉尘开发实验动物病毒基因组实时检测新方法

基本信息

批准号：
15650081
负责人：
佐藤浩
金额：
$ 2.05万
依托单位：
Nagasaki University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15650081/
关键词：
ダスト排気エアロゾル PCR ゲノム実験動物飼育室

项目摘要

1.実験動物飼育室排気系統のフィルターダストからのパラインフルエンザ3型ウイルス(PIV3)の検出感度および特異性の検討MHVの遺伝子診断の場合に決めたものと同様に転写量の最も多いと考えられるNタンパク領域をターゲットにして、1st PCR用のKOF1:5'-ATGTCTTTTGTTCCTGGGCAKOR1:GTGATTCTTCCAATTGGCCA2nd PCR用のKOF2:TCATGAAAGTGYTGAATGAGKOR2:CTACTTACATTTCGCTGCACの計4種類のプライマーを設計してRNA-nested PCRを行った。Single-Step AGPC法を用いてフィルターダストから総RNAを調整し、これをテンプレートとしてKOR1をプライマーにリバース反応(37℃、60分間反応)を行い、cDNAを調整した。各cDNAをテンプレートとして1st PCR、さらにこれをテンプレートとして、2nd PCRを行った。2nd PCR産物を2%アガロースゲルで電気泳動して、175bpサイズのバンドが検出された。この診断法は、数分子のcDNAが存在すれば検出可能なきわめて高感度な方法であることが判明した。2.ダスト捕集法の改良実験動物飼育室中の空中飛散ダストをより効率良く捕集する方法と素材について検討した。通常のペーパー製フィルターと東レ製のナイロン素材であるトレミクロン【○!R】(プリフィルター)を比較したところ、1回目の結果では良好なダスト捕集能を示した。しかし、この比較研究については、再現性をさらに検討することとしている。

1. The sensitivity and specificity of animal breeding room exhaust system (PIV3) HV gene diagnosis in the case of determination of the number of the most important part of the test, the first PCR KOF1: 5'-ATGTCTTTTGTTCCTGGGCAKOR1: 5'-ATGTCTTTTGTTGGGCAKOR 1:GTGATTCTTCCAATTGGCCA2nd PCR KOF2:TCATGAAAGTGYTGAATGAGKOR2:CTACTTACATTTCGCTGCAC's four types of RNA-nested PCR design Single-Step AGPC method is used to adjust the RNA and cDNA in the middle of the process (37℃, 60 minutes). The first PCR, the second PCR, The 2nd PCR product was found in 2% of the samples. This diagnostic method detects the presence of several molecular cDNAs and identifies the possibility of high sensitivity. 2. Improving the collection method of aerial scattering in animal breeding room Usually, the material of the system is selected from the materials of the system. R]() A comparative study of the relationship between reproducibility and quality.

项目成果

期刊论文数量（5）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

渡辺洋二, 大沢一貴他3名: "ケージダストを使用した新しいマウス肝炎ウイルスモニタリング法の開発-遺伝子検出法の応用-"実験動物技術. 36・1. 35-40 (2001)

Yoji Watanabe、Kazuki Osawa 等 3 人：“利用笼内灰尘监测小鼠肝炎病毒的新方法的开发 - 基因检测方法的应用 -”实验动物技术 36・1（2001 年）。

DOI：
发表时间：
期刊：
影响因子：
0
作者：
通讯作者：

Epizootiological and epidemiological study of hantavirus infection in Japan

DOI：
10.1111/j.1348-0421.2004.tb03616.x
发表时间：
2004-01-01
期刊：
MICROBIOLOGY AND IMMUNOLOGY
影响因子：
2.6
作者：
Lokugamage, N;Kariwa, H;Takashima, K
通讯作者：
Takashima, K

Use of Herpesvirus papio 2 as an Alternative Antigen in immunoblotting assay for B virus Diagnosis.

使用狒狒疱疹病毒 2 作为 B 病毒诊断免疫印迹测定中的替代抗原。

DOI：
发表时间：
2004
期刊：
J. Vet. Med. Sci. 66(5)
影响因子：
0
作者：
S. Tanaka;et. al.
通讯作者：
et. al.

DOI：
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作者：
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作者：
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