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酵母のジフテリア毒素耐性遺伝子のクロ-ニング

酵母白喉毒素抗性基因的克隆

基本信息

批准号：
03807026
负责人：
石浦正寛
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Okazaki National Research Institutes
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至 1992
项目状态：
已结题

项目摘要

既に報告したように、ジフテリア毒素A断片遺伝子(DTA)の酵母(Saccharomyces cerevisae)誘導発現系を用いて、酵母の毒素耐性突然変異体を多数分離した。本研究では得られた毒素耐性突然変異体を相補性群に属する変異体の生化学的解析を進めている。まだ遺伝子のクロ-ニングには至っていないが、早晩達成できると考えている。本研究の詳細は速やかに学術誌に発表する予定である。以下に研究成果の概要を簡単に述べる。酵母のDTA耐性変異体の相補性群への分類上記の誘導系を用いて、DTA発現ベクタ-YCp103ーDTAを有するSP1株(SP1/YCp103ーDTA)から、ガラクト-ス培地(すなわちDTA発現状態)でもコロニ-形成ができるガラクト-ス耐性酵母突然変異体を分離した。ガラクト-ス培地で生育するコロニ-、総計50クロ-ンを解析した。先ず各クロ-ンを完全培地YPDで一晩培養し、fluoroorotic acid(FOA)を添加したFOAプレ-トに蒔いてcounter selectionを掛け、プラスミドを失ったsegregantをUra~コロニ-として回収した。次に、このsegregantに改めてDTA発現プラスミドを導入し、ガラクト-ス培地でのコロニ-形成を調べた。およそ半数のクロ-ンはもはやコロニ-を形成できなかった。これらのクロ-クではDTA発現プラスミド上に変異が生じたためにガラクト-ス培地でコロニ-形成ができていたと考えられる。残りの半数のクロ-ンはDTA発現プラスミドを入れ換えても、ガラクト-ス培地でコロニ-形成ができたので、ガラクト-ス耐性は酵母染色体上の突然変異に起因すると考えられる。この染色体上に変異を有するガラクト-ス耐性突然変異体が目的のジフテリア毒素耐性突然変異体である。野性型酵母との戻し交配実験から、7クロ-ンが優性変異体、13クロ-ンが劣性変異体に属することが判明した。劣性変異体13クロ-ンを性転換し、相互に交配することにより、劣性変異体相補性群に分類したところ、4つの相補性群に分かれることが判明した。今後は早急に各相補性群の毒素耐性劣性遺伝子と毒素耐性優性変異遺伝子のクロ-ニングヘと進む予定である。

In this paper, we report the induction of toxin A fragment (DTA) in Saccharomyces cerevisae, and the isolation of toxin tolerance in yeast. The present study is intended to further the biochemical analysis of allogeneic species in response to a sudden change in toxin tolerance and complementary sex groups. In the evening, we will try to find out more. This study was conducted in detail and the academic records were prepared. The following is a brief summary of the research results. The classification of yeast DTA tolerance variation and complementary group is based on the induction system, DTA development status, and the existence of SP1 strain (SP1/YCp103 DTA). The analysis of the total number of children born in the field YPD was cultured overnight and fluoroacetic acid(FOA) was added to counter selection. Next, the segregant changes to the DTA development model, and the DTA development model changes to the DTA development modelおよそ半数のクロ-ンはもはやコロニ-を形成できなかった。This is the first time I've ever seen a woman who's been in a relationship with someone else. Half of the yeast chromosomes are resistant to DTA, and half of the yeast chromosomes are resistant to DTA. This chromosome has a mutation-tolerance mutation-tolerance mutation. The wild type yeast has been identified as a hybrid, a superior variant, and a inferior variant. The classification of complementary sex groups of inferior sex is determined by sex exchange, mating, and so on. In the future, we will focus on the development of complementary groups, such as toxin tolerance, toxin tolerance, and heterosis.