权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

生物時計に関与する分子シャペロンとATP依存性プロテアーゼの同定とその作用機構

生物钟相关分子伴侣和 ATP 依赖性蛋白酶的鉴定及其作用机制

基本信息

批准号：
15032220
负责人：
石浦正寛
金额：
$ 5.38万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

藍色細菌の生物時計は時計タンパク質(KaiA、KaiB、KaiC)及び時計関連タンパク質(Pex、SasA)から構成される。それらタンパク質、タンパク質複合体による時計分子装置の作動機構-「時計の分子装置がどのようにして、24時間周期の振動を発振するか」-の原子レベルでの解明を目指している。時計タンパク質KaiAとKaiCとの複合体形成(相互作用)はリズム発振に重要であり(Uzumaki et al.,2005,Nature Struct.Mol.Biol.)、その相互作用の解明が不可欠である。その一環としてストイキオメトリを決定した。藍色細菌生物時計分野初となるin vitro生化学解析である。in vitroで、AMPPNP(加水分解されないATPアナログ)存在下ではKaiC-KaiA複合体の検出に成功し、複数の手法でKaiA二量体:KaiC六量体=2:1であることを明らかにした。さらに、生体分子相互作用測定装置を用いてATP存在下ではKaiA二量体:KaiC六量体=1:1であることを明らかにした。KaiCリン酸化促進に対するKaiAのdose responseを調べたところ、1/2 max=0.25分子だった。以上より、一分子の六量体型KaiCに二分子のKaiA二量体が結合可能であり、KaiA一分子の相互作用でKaiCリン酸化を充分に促進すると結論した(Hayashi et al.,2004,BBRC)。今後は、KaiAによるKaiCリン酸化促進メカニズムを原子レベルで解明するため、KaiA-KaiC複合体の構造決定を目指す。また、昨年度のKaiAの原子構造解明に続き、KaiBの構造決定に成功した。サブユニット構造は新規フィールドであり、Native構造は極めてユニークな菱形板状構造であった。四量体であることは化学架橋法と分析超遠心法で確認した。静電ポテンシャル解析より、特徴的なサブ構造(1)Negative ridgeと(2)Positive cleftとを見いだした。それぞれのサブ構造にアミノ酸置換変異を導入した藍色細菌変異体を作成しin vitro生化学解析とin vivoリズム解析を行い、両サブ構造が概日リズム発振に重要であることを明らかにした(Iwase et al., submitted)。

The biochronometer (KaiA, KaiB, KaiC) and the chronometer assay (Pex, SasA) were established. The operation mechanism of the molecular device, the time-operated molecular device, the 24-cycle vibration vibration, the 24-cycle vibration machine, the molecular device, the 24-cycle vibration machine, the 24-cycle vibration machine. The formation (interaction) of KaiA KaiC complex (interaction) was analyzed, and the importance of interaction (Uzumaki et al.,2005,Nature Struct.Mol.Biol.) and interaction was explained. The decision was made on the basis of the environmental decision. Biochronology of Saccharomyces cerevisiae was analyzed by in vitro biochemical analysis. In the presence of in vitro and AMPPNP (hydrolyzed ATP compounds), the KaiC-KaiA complex yielded "successful" and plural "KaiA quanta: Kaic hexaqure = 2:1". The apparatus for the determination of biological and molecular interactions is based on the presence of ATP in the presence of KaiA two-dimensional body: KAIC six-dimensional body = 1:1. KaiC acidizing facilitates the acidification of max=0.25 molecules such as KaiA, dose response, and max=0.25 molecules. The combination of two molecules of hexahedral KaiC, two molecules of KaiA, and one molecule of KaiA, interaction of KaiC molecules and acidizing agents can fully promote the interaction between two molecules (Hayashi et al.,2004,BBRC). In the future, KaiA, KaiA, KaiC, acidizing, acidification, acidification. Last year, the KaiA atom made a solution, and the KaiB decided to make a success. New rules and regulations are made, and Native is used to make diamond plates. Tetra-body method, chemical frame method, ultra-center method, confirmation method. In this paper, we analyze the data, and the special information is used to make (1) Negative ridge (2) Positive cleft. In this paper, the biochemical analysis of in vitro, the biochemical analysis of in vivo, the line of analysis, the biochemical analysis of biochemical analysis, the biochemical analysis, the biochemical analysis,