ほ乳類ダイニンβ重鎖の遺伝子クローニング

哺乳动物动力蛋白β重链基因克隆

• 批准号: 04640680
• 负责人: 小川 和男
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Okazaki National Research Institutes
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04640680/
• 关键词: ダイニン; モーター蛋白質; PCR; ATP結合配列

ダイニンファミリーのなかでアクソネームダイニンの全一次構造が91年に、細胞質ダイニンが92年に解明された。いずれも分子中央に4つのATP結合部位があった。特に最初のATP結合部位周辺のアミノ酸配列には高い相同性があり、モーターファミリー間でも種を通じても保存されていた。そこで哺乳類のアクソネームタイプのダイニンβ重鎖cDNAを分離する目的でウニダイニンβ重鎖のTDRCY(1068-1072)配列に相当するオリゴヌクレオチドとFITMNPGY(1188-1195)配列に相当するアンチセンスオリゴヌクレオチドを合成した。この2つのプライマーとマウスの精巣のcDNAを用いてDNA増幅反応(PCR)を行なった。できたDNAをT-ベクターにつなげヌクレオチド配列を決定した(図参照)。増幅されたDNAにはウニ精子ダイニンβ重鎖のATP結合配列があったのでマウスのアクソネームダイニンのβ重鎖が増幅されたと判断した。したがってこのプライマーを使えば鋳型DNAに依存してダイニンのβ重鎖cDNAやジェノミックDNAをPCR法によって増幅させることが可能となった。Query: 1 TDRCYRTLFGALHLHLGGAPEGPAGTGKTETTKDLAKAVAKQCVVFNCSDGLDYLALGKF 60 TDRCY TL +LHL ++GAP GPAGTGKTETTKDL++A++ VFNCS+ +DY + G+ Sbjct: 1068 TDRCYITLTQSLHLVMSGAPAGPAGTGKTETTKDLGRALGIMVYVFNCSEQMDYKSCGNI 1127 Query: 61 FKGLISCGAWACFDEFNRIDLEVLSVVAQQILTIQRGINAGTELLVFEGTELKLDPTCAV 120 +KGL GAW+CFDEFNRI +EVLSVVA Q+ +Q +I E F G E+ L P+ ++ Sbjct: 1128 YKGLAQTGAWGCFDEFNRISVEVLSVVAVQVKCVQDAIRDKKERFNFMGEEISLIPSVGI 1187 Query: 121 FITMNPGY 128 FITMNPGY Sbjct: 1188 FITMNPGY 1195

The first order structure of the protein was developed in 1991, and the cytoplasmic protein was developed in 1992. 4 ATP-binding sites in the middle of the molecule In particular, the initial ATP-binding site is surrounded by a high degree of similarity between the two species. For the purpose of isolation of the mammalian beta relocked cDNA, the sequence of the beta relocked cDNA of TDRCY(1068-1072) was mapped to FITNPGY (1188-1195). 2. DNA amplification (PCR) was performed using cDNA from the genome. The DNA sequence is determined by T-selection (see below). The amplitude of the DNA sequence was determined by the ATP binding sequence of the DNA sequence. The DNA sequence of this gene was amplified by PCR. Query: 1 TDRCYRTLFGALHLHLGGAPEGPAGTGKTETTKDLAKAVAKQCVVFNCSDGLDYLALGKF 60 TDRCY TL +LHL ++GAP GPAGTGKTETTKDL++A++ VFNCS+ +DY + G+ Sbjct: 1068 TDRCYITLTQSLHLVMSGAPAGPAGTGKTETTKDLGRALGIMVYVFNCSEQMDYKSCGNI 1127 Query: 61 FKGLISCGAWACFDEFNRIDLEVLSVVAQQILTIQRGINAGTELLVFEGTELKLDPTCAV 120 +KGL GAW+CFDEFNRI +EVLSVVA Q+ +Q +I E F G E+ L P+ ++ Sbjct: 1128 YKGLAQTGAWGCFDEFNRISVEVLSVVAVQVKCVQDAIRDKKERFNFMGEEISLIPSVGI 1187 Query: 121 FITMNPGY 128 FITMNPGY Sbjct: 1188 FITMNPGY 1195

项目成果

小川 和男: "鞭毛モーターダイニンの分子構造" Cell Science. 9. 33-41 (1993)

小川和夫：“鞭毛运动动力蛋白的分子结构”细胞科学 9. 33-41 (1993)。

Kazuo Ogawa: "Primary Structwe and Junctin of a Dynein Motor Molecule" Zoological Science. 9. 265-274 (1992)

小川一雄：“动力蛋白运动分子的主要结构和连接蛋白”动物学。