ほ乳類ダイニンβ重鎖の遺伝子クローニング

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ダイニンファミリーのなかでアクソネームダイニンの全一次構造が91年に、細胞質ダイニンが92年に解明された。いずれも分子中央に4つのATP結合部位があった。特に最初のATP結合部位周辺のアミノ酸配列には高い相同性があり、モーターファミリー間でも種を通じても保存されていた。そこで哺乳類のアクソネームタイプのダイニンβ重鎖cDNAを分離する目的でウニダイニンβ重鎖のTDRCY(1068-1072)配列に相当するオリゴヌクレオチドとFITMNPGY(1188-1195)配列に相当するアンチセンスオリゴヌクレオチドを合成した。この2つのプライマーとマウスの精巣のcDNAを用いてDNA増幅反応(PCR)を行なった。できたDNAをT-ベクターにつなげヌクレオチド配列を決定した(図参照)。増幅されたDNAにはウニ精子ダイニンβ重鎖のATP結合配列があったのでマウスのアクソネームダイニンのβ重鎖が増幅されたと判断した。したがってこのプライマーを使えば鋳型DNAに依存してダイニンのβ重鎖cDNAやジェノミックDNAをPCR法によって増幅させることが可能となった。Query: 1 TDRCYRTLFGALHLHLGGAPEGPAGTGKTETTKDLAKAVAKQCVVFNCSDGLDYLALGKF 60 TDRCY TL +LHL ++GAP GPAGTGKTETTKDL++A++ VFNCS+ +DY + G+ Sbjct: 1068 TDRCYITLTQSLHLVMSGAPAGPAGTGKTETTKDLGRALGIMVYVFNCSEQMDYKSCGNI 1127 Query: 61 FKGLISCGAWACFDEFNRIDLEVLSVVAQQILTIQRGINAGTELLVFEGTELKLDPTCAV 120 +KGL GAW+CFDEFNRI +EVLSVVA Q+ +Q +I E F G E+ L P+ ++ Sbjct: 1128 YKGLAQTGAWGCFDEFNRISVEVLSVVAVQVKCVQDAIRDKKERFNFMGEEISLIPSVGI 1187 Query: 121 FITMNPGY 128 FITMNPGY Sbjct: 1188 FITMNPGY 1195