巨大モーター蛋白質ダイニンのX線結晶構造に基づいた機能解析
基于巨运动蛋白动力蛋白X射线晶体结构的功能分析
基本信息
- 批准号:17053006
- 负责人:
- 金额:$ 2.5万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
- 财政年份:2005
- 资助国家:日本
- 起止时间:2005 至 无数据
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
ダイニンはATP依存的に微小管上を滑り運動するモーター蛋白質で、重鎖・中間鎖・軽鎖から構成される1000kDaを超える生体超分子複合体である。鞭毛運動や繊毛運動、さらに蛋白質輸送や染色体分離運動を担うモーター蛋白質であり、その生物学的重要性は極めて高い。我々は、モーター活性を保持し構造解析用に精製可能な組換え体タンパク質、細胞質ダイニンモータードメイン(DynMD:3343残基)を用いてX線による構造-機能相関の研究をスタートさせた。動的光散乱法(DLS)でDynMDの分子サイズ均一性を確認し、併せて安定に存在する溶液状態の検索を行った。DLS解析により、均一な分子サイズをもち、かつ安定に存在する溶液条件を見つけることができた。この基本溶液条件をベースにタグ付き、タグ無しの二種類のDynMDを用いて、Native状態、ADP+Vi状態、ADP結合状態と網羅的に結晶化条件の検索を行っているが、現在までのところ単結晶は得られていない。引き続き、AMPPNPやAMPPCPなどのATPアナログ結合状態での結晶化にもトライする予定である。細胞質ダイニンの微小管と結合する領域は、長いcoiled-coil領域によってATPの加水分解を行う球状ドメインと繋がれている。この微小管と結合するドメインはストークドメインと呼ばれている。東京大学大学院総合文化研究科・豊島陽子助教授と共同で細胞質ダイニンストークドメインの組換え体結晶構造解析を並行してスタートさせた。PEG3350を沈殿剤とした時に再現性良く棒状の結晶を得ることに成功している。KEK-PFのAR-NW12ビームラインにおいて、Se置換体結晶を使った3.1〜3.25Å分解能のSe-MAD測定を行った。結晶が非常に柔らく不安定で、回折強度が非常に弱いという特徴をもつが、構造解析向けて鋭意解析計算を行っている最中である。
The ATP-dependent sliding motion of the microtubule, the protein, the heavy lock, the intermediate lock, and the lock make up the 1000kDa super biosupramolecular complex. Flagellar movement, hair movement, protein transport, chromosome segregation movement, protein transport, and protein transport are important in biology. I am able to purify the structure of the active material and maintain the activity of the material. It is possible to replace the body material and cytoplasm of the material. The structure-function correlation of DynMD (DynMD: 3343 residue) was studied using X-rays. The dynamic light scattering method (DLS) of DynMD is used to confirm the homogeneity of molecules, their stability and existence, and their solution state. DLS analysis of により, homogeneous molecule サイズをもち, かつ stable に existence する solution conditions を见つけることができた.このBasic solution conditionsをベースにタグPayき、タグ无しの二级のDynMDを用いて、Native state、ADP+V i state, ADP binding state, and the crystallization conditions of the net are the same as the crystallization conditions. Hingき続き、AMPPNPやAMPPCPなどのATPアナログ bonded stateでのcrystallizationにもトライするpredeterminedである. Cytoplasmic ダイニンのmicrotubules and combined するfield は, long いcoiled-coil field によってATPのhydrolysis を行うspherical ドメインとsystem がれている.このmicrotubeとcombineするドメインはストークドメインと氰れている. Assistant Professor Yoko Toshima, Graduate School of Culture, University of Tokyo, and co-author of Cytoplasmic Structure Analysis of Cytoplasmic Structures. PEG3350 has excellent reproducibility and rod-shaped crystals, and has been successfully used in the field of PEG3350. KEK-PF's AR-NW12 ビームラインにおいて, Se substituted crystallization, and Se-MAD measurement of decomposition energy of 3.1~3.25Å was carried out. The crystallization is very soft and unstable, the bending strength is very weak and the strength is very weak, and the structure analysis direction is very soft and unstable, and the structure analysis direction is the most important one.
项目成果
期刊论文数量(5)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Three Maize Leaf Ferredoxin : NAD(H) Oxidoreductases Vary in Subchloroplast Location, Expression, and Interaction with Ferredoxin
三种玉米叶铁氧还蛋白:NAD(H) 氧化还原酶在叶绿体下的位置、表达以及与铁氧还蛋白的相互作用方面有所不同
- DOI:
- 发表时间:2005
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:栗栖源嗣;他3名;W.A.Cramer et al.;S.Okutani et al.
- 通讯作者:S.Okutani et al.
A Intraprotein transfer o the quinine analogue in inhibitor 2,5-dibromo-3-methyl-6-isopropyl-p-benzoquinone in the cytochrome b_6f complex
A 细胞色素 b_6f 复合物中抑制剂 2,5-二溴-3-甲基-6-异丙基-对苯醌中奎宁类似物的蛋白内转移
- DOI:
- 发表时间:2006
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:Wayne NL;Kuwahara K;Aida K;Nagahama Y;Okubo K;J.Yan et al.
- 通讯作者:J.Yan et al.
Structure of the cytochrome b6f complex:: new prosthetic groups, Q-space, and the "hors d'oeuvres hypothesis" for assembly of the complex
- DOI:10.1007/s11120-004-2149-5
- 发表时间:2005-07-01
- 期刊:
- 影响因子:3.7
- 作者:Cramer, WA;Yan, JS;Smith, JL
- 通讯作者:Smith, JL
光合成における電子伝達超分子系の役割
电子传输超分子系统在光合作用中的作用
- DOI:
- 发表时间:2005
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:Wayne NL;Kuwahara K;Aida K;Nagahama Y;Okubo K;J.Yan et al.;栗栖源嗣
- 通讯作者:栗栖源嗣
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