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カルシウム・カルモデュリン依存性プロインキナーゼIIの細胞内局在決定機構の解析

钙钙调蛋白依赖性脯氨酸激酶II细胞内定位机制分析

基本信息

批准号：
15700290
负责人：
竹内有輔
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

Ca^<2+>/カルモデュリン依存性プロテインキナーゼII (CaM KII)は細胞内に増加したCa^<2+>とカルモデュリンの複合体により活性化される蛋白質リン酸化酵素であり、神経系に特に高濃度に発現している。CaM KIIは、4種類のα、β、γ、δサブユニットが存在しており、さらに、サブユニット間で相同性の高い触媒領域と会合領域の間に存在する可変領域のスプライシングの違いにより、それぞれ数種類のアイソフォームが報告されている。この可変領域がCaM kIIの細胞内局在に関与すると考えられている。本研究では、まず、ラット脳線条体においてCaM KIIサブユニットか細胞内のどの分画に豊富に存在するかを、細胞分画後にそれぞれのサブユニットに対する特異な抗体を用いた免疫ブロットにより検討した。さらに、CaM KIIのδ1、δ3、δ4アイソフォームの安定発現細胞株をNG108-15紳胞に確立し、それらのアイソフォームの細胞内局在について細胞分画法により検討した。ラット脳線条体において、報告されているようにαサブユニットはシナプシンIと同様の局在を示したが、β、γ、δサブユニットはそれとは異なり、それぞれ特有の局在を示した。即ち、CaM KIIサブユニットはそれぞれ、特有の細胞内局在性を持ち特異的な機能に関与していると考えられる。さらにアイソフォーム間での細胞内局在の差異について、δ1、δ3、δ4アイソフォームの安定発現細胞株を用いて検討した。δ1、δ3、δ4アイソフォームはそれぞれ異なる可変領域を有するが、それぞれ特有の細胞内局在を示した。これらの結果は、可変領域が細砲内局在決定に重要な役割を担っていることを示しており、個々のサブユニット及びアイソフォームの細胞内局在の同定は、CaM KIIの機能解明へのアプローチとして一つの有用な手段だと考えられる。

Ca^<2+>/CaMKII increases intracellular Ca^<2+>/CaMKII activity in the complex of Ca^<2+>/CaMKII, which activates protein kinase enzymes and occurs in particularly high concentrations in the nervous system. CaM KII is composed of four kinds of α, β, γ, δ, α, β, γ, This area of variability is relevant to the intracellular processes of CaMkII. In this study, CaM KII cells were isolated from the cells and rich in protein. The cells were isolated from the cells and rich in protein. Specific antibodies were used to detect the immune response. In addition, CaM KII δ1, δ3, δ4 were identified and identified by cytoanalysis in a stable developing cell line NG108-15. In the case of the line, the report is in the middle of the line, and the same situation is indicated in the case of the line, the beta, and the delta. That is to say, CaM KII has a special function in the intracellular structure. In addition, the differences in the cellular structure between the two groups were studied by using stable cell lines with δ1, δ3 and δ4.δ1, δ3 and δ4 are different from each other in different fields. The result is that the variable domain is responsible for determining the important service of the cell, and the variable domain is responsible for determining the important service of the cell. The variable domain is responsible for determining the function of the CaM KII.