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単一細胞PCR法によるATL及びHAM患者組識からのHTLV-I検出

单细胞PCR法检测ATL和HAM患者组织中的HTLV-I

基本信息

批准号：
04670207
负责人：
赤木忠厚
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Okayama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1992
资助国家：
日本
起止时间：
1992 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04670207/
关键词：
ATL HAM PCR HTLV-1

项目摘要

我々の開発した単一細胞PCR法を使用し、パラフィン包埋したATL患者のリンパ節及び胃,HAM患者の脊髄標本中の各種細胞におけるHTLV‐I感染の有無を検索し以下の結果を得た。〔ATL〕通常のPCR法ではリンパ節,胃ともにHTLV‐I tax遺伝子を検出できたので,単一PCR法を適用する前段階として50-100個の細胞をマイクロマニピュレーターで集めPCR法を行った。リンパ節:濾胞芽中心の細胞では1/12,T細胞領域では2/12,リンパ洞細胞では0/2にtax遺伝子を検出した。胃:リンパ装置芽中心では1/20,平滑筋では0/24,胃粘膜上皮では0/2にtax遺伝子を検出した。以上芽中心及びT領域の細胞に低頻度でHTLV-I感染細胞が存在することがわかったが,未だ検索例が少く,さらに検索を進める必要がある。〔HAM〕3症例のHAM脊髄標本のうち1例で,通常のPCR法によりHTLV-Iゲノム(tax,pol)を検出できたので,この症例を使用し55cycleの単一細胞PCR法でtax遺伝子を検索し次のような結果を得た。perivascular cuffingを示すリンパ球7/15,神経細胞2/7,corpora amylacea2/5,アストロサイト0/5上衣細胞1/2に陽性シグナルを得た。corpora amylaceaに陽性シグナルを得たことは予期しない結果であったが,HTLV-I感染細胞の変性核を含んでいた可能性もある。神経細胞,上衣細胞に陽性シグナルを得たことも重要な新知見であるが,artifactの可能性を除外すると共にさらに検索例を増やして検討する必要がある。なお,reverse transcriptase PCR法による検索は本年度中には行うことができなかった。

We developed a single-cell PCR method to detect the presence or absence of HTLV-1 infection in various cells of ATL patients and HAM patients using the following results: [ATL] PCR is usually used to detect HTLV-1 taxon in the first stage, and 50-100 cells in the second stage. The cell in the center of the filter bud is 1/12, the T cell field is 2/12, and the cell in the hole is 0/2. Stomach: the bud center of the device is 1/20, the smooth tendon is 0/24, and the gastric mucosa epithelium is 0/2. HTLV-I infection occurs at low frequencies in cells in the above bud centers and T domains, and is not detected frequently. [HAM] 3 cases of HAM backbone disease in 1 case, the usual PCR method for HTLV-I (tax,pol) detection, this case using <$55 cycles of single-cell PCR method for tax gene detection, the results were obtained. perivascular cuffing is indicated by 7/15 of the balls, 2/7 of the neurons, 2/5 of the corpora amylacea, 0/5 of the upper cells, 1/2 of the positive cells. Corona amylacea is positive, but not expected. HTLV-I infected cells have different nuclear potential. Neurons, cells, positive cells, positive The reverse transcriptase PCR method is used to detect the middle of the year.