ヒトDNA修復酵素cDNAのクローニング

人类DNA修复酶cDNA的克隆

• 批准号: 04680215
• 负责人: 早川 浩
• 金额: $ 0.83万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04680215/
• 关键词: cDNA; DNA修復; 発現ベクター; クローニング

I)本年度の研究においては、既に上記の方法によりcDNAクローニングが成功しているO^6メチルグアニンDNAメチルトランスフェラーゼに関して、より詳細な研究をひき続き行なった。(1)ヒトのメチルトランスフェラーゼcDNAをプローブとしてマウスおよびラットのcDNAをクローニングすることが出来た^<(2)(5)>。またこれらのヒトを含む哺乳細胞由来のcDNAを大腸菌内で発現させ、これらの修復酵素を大量に生産させることにより酵素そのものを精製することにも成功した。現在これらの純化された酵素標品を用い酵素化学的な解析を進めるとともに、抗体も作成することが出来たので今後これをプローブとして各種癌由来細胞株さらには組織レベルでの解析へと進む計画である^<(3)>。(2)クローニングされたマウスのcDNAをプローブとしてマウス遺伝子をクローニングした。その結果マウスの遺伝子もヒト同様非常に大きな遺伝子でその全長は150Kb以上に及ぶことが明かとなった^<(1)(2)>。このことはまさに従来の染色体DNAを用いたトランスフェクション法によるクローニングの限界を示すものである。今後は、トランスジェニックマウスを作成することによりこの酵素を欠損するミュータントマウス作成し個体レベルでこの酵素の機能を研究する計画である。この目的のため今回クローニングされたマウス遺伝子を用いてtagettingベクターを構築した。II)一方、同様な方法で新たなヒトのDNA修復酵素cDNAのクローニングするため今回色素性乾皮症F群およびファンコニィー貧血症の原因遺伝子のクローニングが目標とされたが今のところ期待できるような成果は挙がっていない。この研究の過程で遺伝病由来の細胞株をクローニング用の受容細胞として用いる場合の問題点がいろいろ明かとなってきた。この点に関してI)の研究の成果として哺乳細胞由来のcDNAを大腸菌内で効率よく発現させることができ、ヒトの修復酵素の研究が大腸菌の系で十分可能なったこと^<(4)>、しかもその結果大腸菌の遺伝的欠損を十分相補できることなどが明かとなった。このようなことから、ヒト遺伝病に相当する大腸菌側のミュータントが存在する場合には大腸菌の系を用いたスクリーニングがcDNAのクローニングにも十分有効でないかと考えている。今後はこのような方向で研究を進める計画である。(1)-(5)は裏面の発表論文リストの順番に従っています。

I) This year's research was conducted in detail and successfully using the above-mentioned methods. (1)The first step is to create a database for the first time.^<2> The expression and purification of DNA in E. coli The purification of enzyme markers and enzyme chemical analysis are now being carried out in the future. The analysis of various cancer-derived cell lines and tissues is planned. (2)The DNA of the virus The total length of the product is more than 150Kb, and the product is less than 150Kb.^<(1)(2)> This is the first time that the DNA of the chromophore has been used in the study. In the future, we plan to study the function of the enzyme by creating a new enzyme system. The purpose of this article is to construct a new model for the future. II) A new approach to DNA repair enzyme cDNA sequencing and sequencing for Xeroderma pigmentosum group F is proposed, and a new approach to DNA repair enzyme cDNA sequencing and sequencing is proposed. The process of this research is to identify the origin of the disease cell lines and to identify the problems in the use of the recipient cells. The results of this research are very likely to complement the results of the study on cDNA derived from mammalian cells and the lack of gene damage in Escherichia coli. In this case, the E. coli system is used in the presence of E. coli, and the cDNA system is used in the presence of E. coli. The future direction of research (1)-(5) The order in which the paper is published is as follows:

项目成果

Shiraishi,A.: "Isolation and characterization of cDNA and genomic sequences for mouse O^6-methylguanine-DNA methyltransferase." Carcinogenesis. 13. 289-296 (1992)

Shiraishi,A.：“小鼠 O^6-甲基鸟嘌呤-DNA 甲基转移酶 cDNA 和基因组序列的分离和表征。”

Chueh,L.: "Specific amino acid sequences required for O^6-methylguanine-DNA methyltransferase activity : analyses of three residues at or near the methyl acceptor site." Carcinogenesis. 13. 837-843 (1992)

Chueh,L.：“O^6-甲基鸟嘌呤-DNA 甲基转移酶活性所需的特定氨基酸序列：分析甲基受体位点处或附近的三个残基。”

Sakumi,K.: "Cloning and expression of cDNA for rat O^6-methylguanine-DNA methyltransferase." Nucleic Acids Res.19. 5597-5601 (1991)

Sakumi,K.：“大鼠 O^6-甲基鸟嘌呤-DNA 甲基转移酶 cDNA 的克隆和表达。”

Nakatsu,Y.: "Organization and expression of the human gene for O^6-methylguanine-DNA methyltransferase." Mutation Research. 293. 119-132 (1993)

Nakatsu,Y.：“O^6-甲基鸟嘌呤-DNA 甲基转移酶人类基因的组织和表达。”

Fukuhara,M.: "Induced synthesis of O^6-methylguanine-DNA methyltransferase in rat hepatoma cells exposed to DNA-damaging agents." Jpn.J.Cancer Res.83. 72-77 (1992)

Fukuhara,M.：“在暴露于 DNA 损伤剂的大鼠肝癌细胞中诱导 O^6-甲基鸟嘌呤-DNA 甲基转移酶的合成。”