活性酸素によるDNA障害を防ぐヒト蛋白の分離と解析

分离和分析可预防活性氧引起的 DNA 损伤的人类蛋白质

• 批准号: 07680584
• 负责人: 早川 浩
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07680584/
• 关键词: 酸化ストレス; 突然変異; ヌクレオチド代謝; DNA複製; DNA修復; ヒト; mutagenesis

これまでの研究で、生体内で生じる強力な突然変異誘発物質、8-oxo-dGTPをヌクレオシドにまで分解する代謝経路の最終段階に働いていると考えられる8-oxo-dGMPaseをヒト細胞から部分的に精製していた。平成7年度の研究においては、この酵素を純化する為に一般に使用されているさまざまなカラムを用いて精製を試みたが、以前としてこの蛋白を純化することが出来なかった。そこで今回新たにアフィニティーカラムを作成することを試みさまざまな8-oxo-dGMP誘導体を合成することが出来た。これまでわかっているこの酵素の基質特異性の情報をもとにこの酵素にアフィニティーを有することが期待されるカラム担体を九大薬学部の佐々木教授および永次助手の協力を得て研究代表者である早川自ら合成を試みた。現在までにデオキシグアノシンを原料として回収率よく8-オキソデオキシグアノシンを大量に合成することができた。またさらにこの8-オキソデオキシグアノシンの5'OH部位に、両端にそれぞれアミノ基と燐酸基をもちその間に適当な長さのスペーサーを持つ化合物を用いてカップリングさせたところ、スペーサー末端にアミノ基をもつ8-oxo-dGMP誘導体を初めて合成することが出来た。なおこの化合物の構造はMNRおよびマススペクトラムを用いた解析により確認している。現在この化合物末端のアミノ基を用いてカラム担体に結合させる段階に進んでいる。

In this study, the production of potent mutagenic substances in vivo, 8-oxo-dGTP in the final stages of the metabolic pathway, and the purification of 8-oxo-dGMPase in the cellular domain were investigated. In 2007, we conducted research on the purification of enzymes for general use. This is the first time that a new 8-oxo-dGMP inducer has been synthesized. The substrate-specific information of the enzyme was obtained by the cooperation of Professor Saki and Assistant Yongji of the Nine Institutes of Chemistry, and the representative of the research was obtained by the experiment of Hayakawa Self-synthesis. Now, we have a lot of raw materials, and we have a lot of raw materials. In addition, the 8-oxo-dGMP inducer was synthesized from the 5'OH site of the compound, the terminal site, the terminal site, the phosphate group, and the appropriate length of the compound. The structure of the compound is MNR. Now the terminal groups of these compounds are used in the synthesis of these molecules.

项目成果

Hayakawa H. et. al.,: "Generation and elimination of 8-oxo-7,8-dihydro-2'-deoxyguanosine 5'-triphosphate, a mutagenic substrate for DNA synthesis, in human cells." Biochemistry. 34. 89-95 (1995)

早川H.等。

Sekiguchi M. and Hayakawa H.: "DNA damage and Repair : Molecular and Cell Biology Mammalian Enzymes for Preventing Mutations Caused by Oxidation of Guanine Nudeotides." Humana Press Inc, Totowa, NJ Editors, Merl F. Hoekstra and Jac A. Nickoloff,(印刷中),

Sekiguchi M. 和 Hayakawa H.：“DNA 损伤和修复：分子和细胞生物学哺乳动物酶预防鸟嘌呤核苷酸氧化引起的突变。”Humana Press Inc，Totowa，新泽西州编辑，Merl F. Hoekstra 和 Jac A. Nickoloff， （印刷版），

早川浩、續輝久: "活性酸素による突然変異を防ぐヒト酵素系" 実験医学. 13. 1730-1736 (1995)

Hiroshi Hayakawa、Teruhisa Tsune：“防止活性氧引起突变的人体酶系统”实验医学 13. 1730-1736 (1995)。