cDNA発現ベクタ-を用いた高発癌性遺伝病の遺伝子クロ-ニングと解析

使用 cDNA 表达载体进行高致癌性遗传病的基因克隆和分析

基本信息

批准号：
03152091
负责人：
早川浩
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1 DNA修復酵素であるO^6メチルグアニンメチルトランスフェラ-ゼの研究については予定通りの進展が得られた。(1)ヒトのメチルトランスフェラ-ゼの遺伝子がクロ-ニングされ、この遺伝子が5ケのエクソンをもち170kb以上の巨大遺伝子であることが明らかとなった。また、この遺伝子のプロモ-タ-領域は非常にGCrichでTATAboxやCAATboxをもたない。(2)ヒトの酵素が大腸菌で大量に生産され、精製されたこの酵素を抗原とした抗体が得られた。この抗体はヒトの酵素のみを特異的に認識しマウス、ラット等の酵素とは反応しない。(3)マウス、ラットのcDNAが分離された。これらのシ-クエンスから予想される蛋白の構造は大腸菌等のプロカリオ-ト酵素とも部分的に高いホモロジ-をもち、これらのcDNAを大腸菌のミュ-タント中で発現させるとその遺伝子欠損を生物学的に相補できることが明らかとなった。(4)ラットのヘパト-マ細胞では、さまざまなDNA障害によってこの酵素の誘導が観察され、これがTranscriptionのレベルで起こることが明らかとなった。(5)マウスの遺伝子がクロ-ニングされた。この遺伝子もヒトの遺伝子同様非常に大きく(>145kb)すくなくとも4ケのエクソンよりなり全体的な構造はヒトの遺伝子に類似していた。今後は、ヒトの癌細胞で高頻度に認められるMer形質への変化の原因を明らかにするとともに、特異性のたかい抗体が得られたので酵素欠損の検出系を確立し、化学療法への応用の為の基礎的研究をおこなう。また、マウスの遺伝子が分離されたのでジ-ンタ-ゲッテッングによりモデルマウスを作成しこの遺伝子欠損が細胞の癌化とどのような関係にあるのかを個体レベルで明らかにしていきたい。2 遺伝病である色素性乾皮症及びファンコニ-貧血症の原因遺伝子のクロ-ニングの試みはひき続き進められているがいまのところはっきりとした成果は得られていない。

1。计划在研究DNA修复酶O^6甲基鸟嘌呤甲基转移酶的计划中取得的进展。（1）克隆人类甲基转移酶基因，并揭示该基因是一个巨大的基因，具有5个外显子和超过170 kb的基因。此外，该基因的启动子区域非常GCRICH，没有Tatabox或Caatbox。（2）人类酶在大肠杆菌中大量生产，并以纯化的酶为抗原。该抗体专门识别人类酶，并且不与小鼠，大鼠等的酶反应。（3）分离出小鼠和大鼠的cDNA。这些序列预测的蛋白质结构与procarioto酶（如大肠杆菌）部分同源，并且已经揭示了当这些cDNA在大肠杆菌突变体中表达时，就可以从生物学上补充基因缺乏症。（4）通过大鼠肝癌细胞中各种DNA损伤观察到该酶的诱导，并发现这发生在转录水平。（5）克隆小鼠基因。该基因也很大（> 145kb），例如人类基因和至少四个外显子，其整体结构与人类基因相似。将来，我们将阐明在人类癌细胞中经常观察到的MER性状变化的原因，并且由于已经获得了高度特异性的抗体，因此我们将建立一个用于酶缺乏症的检测系统，并进行化学疗法的基础研究。此外，由于已经孤立了小鼠基因，因此我们想通过绅士观点来创建模型小鼠，以在单个级别揭示该基因缺乏症与细胞癌的关系。 2试图克隆负责遗传性疾病的基因，以及fanconi-Anemia的遗传性疾病，但到目前为止尚未取得明显的结果。