血流により機能的変化を生じた内皮細胞と、内皮下平滑筋細胞の相互作用

由于血流而发生功能变化的内皮细胞与内皮下平滑肌细胞之间的相互作用

• 批准号: 05837009
• 负责人: 三俣 昌子
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: 山梨医科大学
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 1995
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05837009/
• 关键词: 内皮細胞; ずり応力; 増殖; ストレスファイバー; cDNAライブラリ; mRNA; 動脈硬化; 血流; 血管透過; 血管内皮細胞; 血小板由来増殖因子; グリコスアミノグリカン; ZO-1; コラーゲン; 平滑筋細胞; GAGs産生; ならし培地

動脈硬化が血管の分岐部に好発することから、血流による内皮細胞(内皮)の形態および機能変化が病変発生の主要原因と考えられる。すなわち血行力学的作用により内皮の性質すなわち増殖因子、細胞表層のGAGsや線維の産生、透過性の変化を招き、この変化が内膜平滑筋細胞の機能や形態変化、さらに血管壁への脂質沈着や血栓形成、壁肥厚を導くと考えられる。本研究はこの機序の解明を目的とし、in vitro実験により、今年度は以下の結果を得た。1.高ずり応力(30dyn/cm^2)負荷により、培養ウシまたはブタ内皮のDNA合成が負荷後1時間より減少し始め12時間では対照静置細胞のそれの約1/2となった。rhodaminで染色されるstress fiberは高ずり応力負荷後30分から形成され始めたので、ずり応力によるDNA合成抑制とstress fiber形成の関連を検討した。cytochalasin B(0.1〜2.0μg/ml、2、4、6時間処理)は、ずり応力によるstress fiber形成を抑制し、対照細胞のDNA合成を増加させた。しかしずり応力によるDNA合成抑制を阻止しなかった。更にずり応力によるこのDNA合成抑制は、tyrosine kinase抑制剤であるgenistein(200μM)やNO合成酵素抑制剤であるL-NMMAでも阻止されなかった。以上より、ずり応力による内皮のDNA合成抑制はstress fiber形成、tyrosine kinase活性化、NO合成を介さずに生ずる可能性がある。2.differential hybridization法により、高ずり応力(30dyn/cm^2)4時間負荷内皮のcDNAライブラリーを作製し、ずり応力に特異的にmRNA発現が増強する9個のcDNAクローンを得た。内1個はGROと94%の相同性を示し、抗GRO抗体はずり応力による内皮への単球接着を阻止した。ずり応力に特異的に発現が増強する遺伝子のcDNAクローンはin vivoおよびin vitroにおける動脈硬化発生機序の解明に有力な手段となると考える。

Arteriosclerosis が vascular の gaps of good に 発 す る こ と か ら, blood flow に よ る endothelial cells (endothelial) の form お よ び function - the が disease - born 発 の main reason と exam え ら れ る. す な わ ち blood line mechanics role に よ り endothelial の nature す な わ ち raised yield factor, cell surface の GAGs や line d の produce, through sexual の - を recruit き, こ の - が lining smooth muscle cells の function や morphological variations, さ ら に hemal wall へ の lipid shen with や thrombosis, wall hypertrophy を guide く と exam え ら れ る. in this study, the を <s:1> sequence <e:1> explains the を objective と と, in vitro experiments によ によ, and the を results of the following <s:1> this year を obtain た. 1. High ず り 応 force (30 dyn/cm ^ 2) load に よ り, cultivating ウ シ ま た は ブ タ endothelial の DNA synthesis が load after 1 time よ り reduce し 12 め time で は polices according to quiet place cells の そ れ の about 1/2 と な っ た. Rhodamin で dyeing さ れ る stress fiber high は ず り 応 force load after 30 か ら form さ れ beginning め た の で, ず り 応 force に よ る DNA synthesis inhibition と stress fiber forming の masato even を beg し 検 た. cytochalasin B(0.1-2.0μg/ml, treated at 2, 4, 6 times) ず, ず 応 force によるstress fiber forms を inhibiting <s:1> and を increasing させた of <s:1> DNA synthesis in the corresponding cells. <s:1> ず ず 応 応 force によるDNA synthesis inhibition を prevent な な った った. More に ず り 応 force に よ る こ の DNA synthesis inhibition は, tyrosine kinase inhibition tonic で あ る genistein (200 microns) や NO synthetic enzyme inhibition tonic で あ る L - NMMA で も stop さ れ な か っ た. The above よ ず and ず 応 応 force による endothelial <s:1> DNA synthesis inhibits the formation of <s:1> stress fiber, tyrosine kinase activation, and NO synthesis を mediates the さずに generation ずる possibility がある. 2. The differential hybridization method に よ り, high ず り 応 force (30 dyn/cm ^ 2) 4 time load endothelial の cDNA ラ イ ブ ラ リ ー を as し, ず り 応 force に specific に mRNA 発 が now raised strong す る nine の cDNA ク ロ ー ン を た. Within 1 は GRO と 94% の identity を し, resistance to GRO antibody は ず り 応 force に よ る endothelial へ の 単 ball then を stop し た. ず り 応 force に specific に 発 が now raised strong す る posthumous son 伝 の cDNA ク ロ ー ン は in vivo お よ び in vitro に お け る arteriosclerosis 発 vitality sequence の interpret に powerful tools to な と な る と exam え る.

项目成果

Arisaka, Tomoyuki: "Effects of shear stress on glycosaminoglycan synthesis in vascular endothelial cells." Annals of NewYork Academy of Science. 748. 543-554 (1995)

Arisaka, Tomoyuki：“剪切应力对血管内皮细胞中糖胺聚糖合成的影响。”

Yoshida, Yoji: "Hemodynamic-force-induced difference of interendothelial junctional complexes." Annals of NewYork Academy of Science. 748. 104-121 (1995)

Yoshida，Yoji：“血流动力学引起的内皮间连接复合物的差异。”

Arisaka T,Mitsumara M,Kawasumi T et al.: "“Effects of shear stress on glycosaminoglycan systhesis in vascular endothelial cells."in Atherosclerosis III" New York Academy of Science, (1995)

Arisaka T、Mitsumara M、Kawasumi T 等人：“《动脉粥样硬化 III》中的“剪切应力对血管内皮细胞糖胺聚糖合成的影响”，纽约科学院 (1995)

Mitsumata, Masako: "Glycosaminoglycan and collagen synthesis and tight junction of endothelial cells under shear stress in vitro." Biorheology. 32. 157 (1995)

Mitsumata，Masako：“体外剪切应力下糖胺聚糖和胶原蛋白的合成以及内皮细胞的紧密连接。”

三俣 昌子: "血行力学的因子に対する内皮細胞の反応" 動脈硬化. 21. 473-477 (1993)

Masako Mitsumata：“内皮细胞对血流动力学因素的反应”动脉硬化。 21. 473-477 (1993)