ヒトNADH-シトクロムb_5還元酵素の電子伝達の分子機構

人NADH-细胞色素b_5还原酶电子转移的分子机制

• 批准号: 06670150
• 负责人: 調 恒明
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: 大分医科大学
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06670150/
• 关键词: NADH-シトクロムb_5還元酵素; X-線構造; 部位特異的変異法; 反応機構; 酸化還元

これまでに、摂南大学・高野らとの共同研究によりヒトNADH-シトクロムb_5還元酵素の3次構造を明らかにした。この結果から、本酵素の94番目のThrが補酵素FADのイソアロキサジン環のN5原子から約3A^^○の距離にあることが示された。そこで本研究では、既に確立していた本酵素の大腸菌における大量発現系をもとに、部位特異的変異法によりThr-94を種々のアミノ酸残基に置き換えた変異酵素を作製し、その酵素学的パラメータを測定することにより、本残基の反応における役割を明らかにすることによって反応機構の本質を理解することを目的としている。これまでにThe-94をSer,Ala,Cys,Asnに置換した発現プラスミドを作製したが、Thr-94→Alaの変異では活性をほとんど検出できず、本残基は酵素活性に必須であると考えられた。Thr-94→Serの活性は野生型とほぼ同程度で、94番目にOH基があることが重要であると考えられた。Thr-94→Asnの変異では、活性が約0.2%に低下していたが、stopped flow法で測定した還元半反応は、野生型と同程度の速度を保っており酸化半反応速度が特異的に遅くなっていると考えられた。これらの結果からThr-94は反応に極めて重要であると結論した。現在これらの変異酵素の3次構造を解析すべく、大量精製、結晶化を行なっている。

Takeshi and Takano of Nan University jointly studied the nadh-enzyme B5 enzyme and made it three times. The results show that the enzyme 94 Thr enzyme FAD enzyme ambient temperature N5 atom concentration is about 3A ^ 0. The temperature difference between the two enzymes is sensitive. In this study, it is necessary to make sure that this enzyme is used to detect a large number of bacteria, the location-specific method is to detect the acid residues of Thr-94, and the enzyme assay is used to determine the amount of enzyme in this study. This anti-tax system is used to understand that the purpose of the anti-tax mechanism is to understand that the purpose of the anti-war mechanism is to understand the situation. The The-94 Ser,Ala,Cys,Asn test shows that the enzyme activity of the Thr-94 Ala enzyme must be verified by the enzyme activity test. Thr-94, Ser, wild type, OH, wild type, wild type and 94 orders. Thr-94, Asn, and activity were 0.2%, 0.2%, 0.2%, 0.2%, 0.2%, 0.2%, 0.2%, 0.2%, 0.2%, 0.2%, 0.2%, 0.2%, 0.2%, 0.2%, 0.2%, 0.2%, 0.2%, 0.2%, 0.2%, 0.2%, 0.2%, 0.2%, 0.2%, 0.2%, 0.2%, 0.2%, 0.2%, 0.2%, 0.2%, 0.2%, 0.2% and 0.2%, respectively. The results of this study show that the Thr-94 has a negative impact on important information. At present, the enzyme is used for three times to analyze, analyze, refine, and crystallize.

项目成果

T.E.Meyer,Shirabe,K et al: "Transient kinetics of intracomplex electron transfer in the human cytochrome b_5 reductase-cytochrome b_5 system" Arch.Biochem.Biophys.(発表予定). (1995)

T.E. Meyer、Shirabe、K 等人：“人细胞色素 b_5 还原酶-细胞色素 b_5 系统中复合物内电子转移的瞬时动力学”Arch.Biochem.Biophys（即将发表）。