DNA障害後の肝細胞増殖におけるp53の細胞周期制御機能の解析

DNA损伤后p53对肝细胞增殖的细胞周期调控作用分析

• 批准号: 06670212
• 负责人: 小川 勝洋
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Asahikawa Medical College
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06670212/
• 关键词: p53; antisense oligonucleotide; Gl arrest; genetic instability; DNA damage; 肝細胞; cell cycle checkpoint; UV

p53遺伝子の本来の働きは遺伝子不安定性(genetic instability)の防御である可能性が指摘されている。すなわち、細胞がDNA障害を受けた際に細胞回転をGI期で停止させてDNA修復に必要な時間を稼ぐということである。したがって、正常p53遺伝子の機能が失われている細胞ではこのようなcell cycle checkpoint機能が失われ、DNAは障害を持ったまま複製し、染色体異常や突然変異を生じやすくなると考えられる。我々はこのようなp53の働きを分離ラット肝細胞を用いて検討し、以下の結果を得た。(1)新生児ラット、マウス肝細胞をコラゲナーゼ灌流により分離して、EGF,insulin添加williams E 培地にて培養し、その増殖動態をflow cytometry,BRDU labelingなどにより検討したところ、cell cycleが進み24時間からS期に入ることが明らかになった。(2)これらの細胞に対して、UV,mitomycin C,antinomycin D の処理によりDNA障害を与えたところ、Gl arrest に陥ること及びその時にp53が核内に異常蓄積すること、さらにこの蓄積の原因はp53の寿命が延長するためであることが明らかになった。また、そのGl arrestは24時間後に解除された。(3)antisense oligonucleotideをp53 cDNAの開始コドンから20merに合わせて合成し、それを培地中に加えることにより、UV照射後のp53の発現を著明に抑制することができた。この条件下でUV照射後の増殖を調べたところGl arrestは約50%解除された。以上の結果は、p53はDNA障害後のGl arrestに直接関わっていることを示すものである。今後、このGl srrest能が肝発癌過程の前癌細胞及び癌細胞でどのように変化するかを検討する予定である。

p53 伝 sub-genetic instability 伝 defense である possibility が criticism されて る る る る る original sub-genetic instability. す な わ ち, cell DNA が handicap of を by け た interstate に cells back to the planning phase を GI で stop さ せ て DNA repair に な necessary time を grain ぐ と い う こ と で あ る. し た が っ て, normal traces of p53 伝 の function が lost son わ れ て い る cells で は こ の よ う な cell cycle checkpoint function lost が わ れ, DNA は handicap of を hold っ た ま ま copy し, chromosome abnormality や suddenly born - different を じ や す く な る と exam え ら れ る. I 々, 々, <s:1>, ような, ような, p53, <s:1>, を, を, isolated ラット liver cells を, and used て検 て検, て検 to obtain ような. The following <s:1> results を obtained た. (1) where new ラ ッ ト, マ ウ ス hepatocellular を コ ラ ゲ ナ ー ゼ perfusion に よ り separation し て, EGF and insulin added Williams E petty に て し, そ の raised colonization dynamics を flow cytometry, BRDU labeling な ど に よ り beg し 検 た と こ ろ, cell cycleが enters み24 time ら らS period に enters る とが とが brightness ら になった になった. (2) <s:1> れら <s:1> cells に deal with によ <s:1> DNA obstruction を and えたと ろ ろ ろ, Gl arrest against <s:1> て, UV,mitomycin C,antinomycin D When に 陥 る こ と and び そ の に p53 が accumulation of に anomalies in the nuclear す る こ と, さ ら に こ の accumulation の reason は p53 の living longer す が る た め で あ る こ と が Ming ら か に な っ た. Youdaoplaceholder0, そ また Gl arrest そ 24 hours later に release された. (3) antisense oligonucleotide を p53 cDNA の began コ ド ン か ら killing 20 に close わ せ て synthetic し, そ れ を during the petty に え る こ と に よ り, after UV irradiation の p53 の 発 now を zhao Ming に inhibit す る こ と が で き た. Under <s:1> <s:1> conditions, after でUV irradiation, <s:1> proliferation を is adjusted to べたと ろGl arrest <e:1> by approximately 50%, and された is relieved. The above <s:1> results <e:1> and the <s:1> Gl arrestに after p53 <s:1> DNA damage are directly related to わって る る とを とを とを, す す である である である である である. In the future, こ の Gl srrest can process の が 発 liver cancer before cancer cells and び cancer cells で ど の よ う に variations change す る か を beg す 検 る designated で あ る.

项目成果

Kunihiko Tsuji: "Recovery from ultraviolet-induced growth arrest of primary rat hepatocytes by p53 antisense oligonucleotide treatment." Molecular Carcinogenesis. 9. 167-174 (1994)

Kunihiko Tsuji：“通过 p53 反义寡核苷酸治疗，从紫外线诱导的原代大鼠肝细胞生长停滞中恢复。”

Masayuki Tokumitsu: "Infrequent loss of heterozygosity and mutation of the p53 gene in immortal and transformed mouse embry fibroblbasts." Molecular Carcinogenesis. 10. 52-57 (1994)

Masayuki Tokumitsu：“在永生和转化的小鼠胚胎成纤维细胞中，杂合性丢失和 p53 基因突变的情况很少见。”

Masayuki Tokumitsu: "Homology of p53 intronic sequences between four laboratory mouse strains and lapanese wild mice." Genome. 37. 1022-1026 (1994)

Masayuki Tokumitsu：“四种实验室小鼠品系和拉帕野生小鼠之间 p53 内含子序列的同源性。”

Takayuki Kadohama: "Indistinct cell cycle checkpoint after u.v. damage in H-ras-transformed mouse liver cells despite normal p53 gene expression." Oncogene. 9. 2845-2852 (1994)

Takayuki Kadohama：“尽管 p53 基因表达正常，但 H-ras 转化的小鼠肝细胞受到紫外线损伤后，细胞周期检查点不明显。”

Hiroyuki Nishimori: "Frequent dejetion in chromosome 4 and duplication of chromosome 15 in liver epithelial cells derived from long-term culture of C3H mouse hepatocytes." Int. J. Cancer. 59. 108-113 (1994)

Hiroyuki Nishimori：“长期培养 C3H 小鼠肝细胞的肝上皮细胞中 4 号染色体频繁缺失和 15 号染色体重复。”