ヒト食道癌におけるRT-PCR法を用いた制癌剤耐性関連遺伝子の発現量測定の意義

1.材料と方法:(1)食道癌をはじめとする6種類の扁平上皮癌細胞株、および食道癌の内視鏡生検材料を用いた。(2)GST-π、mdr-1、MT-IIAに対するPCRプライマーを作製した。(3)制癌剤に対する感受性試験はMTTアッセイを用いた。(4)遺伝子発現量の定量はNorthern blot法とRT-PCR法を用いた。2.結果:(1)癌細胞と臨床組織より得られたtotal RNAに対して、RT-PCR法を行い、GST-π、mdr-1、MT-IIAに対応する435bp,290bp,179bpの大きさのPCR産物が得られた。これらは、プライマーの設計時に予想した大きさであった。(2)PCR産物と至適PCRサイクル数をそれぞれのプライマーについて求めた。(3)癌細胞株のCDDP耐性は、GST-π、MT-IIAのmRNAレベルと、ADM耐性はMT-IIAのmRNAレベルと正の相関を示した。(4)ヒト食道癌組織中のmdr-1mRNAレベルは正常粘膜に比べて高く、逆にGST-π、MT-IIAのmRNAレベルは低い傾向にあった。(5)食道癌組織中のMT-IIAのmRNAレベルは、CDDPによる増殖抑制率と負に相関する傾向にあった。

1.材料と方法:(1)食道癌をはじめとする6種類の扁平上皮癌細胞株、および食道癌の内視鏡生検材料を用いた。(2)GST-π、mdr-1、MT-IIAに対するPCRプライマーを作製した。(3)制癌剤に対する感受性試験はMTTアッセイを用いた。(4)遺伝子発現量の定量はNorthern blot法とRT-PCR法を用いた。2.結果:(1)癌細胞と臨床組織より得られたtotal RNAに対して、RT-PCR法を行い、GST-π、mdr-1、MT-IIAに対応する435bp,290bp,179bpの大きさのPCR産物が得られた。これらは、プライマーの設計時に予想した大きさであった。(2)PCR産物と至適PCRサイクル数をそれぞれのプライマーについて求めた。(3)癌細胞株のCDDP耐性は、GST-π、MT-IIAのmRNAレベルと、ADM耐性はMT-IIAのmRNAレベルと正の相関を示した。(4)ヒト食道癌組織中のmdr-1mRNAレベルは正常粘膜に比べて高く、逆にGST-π、MT-IIAのmRNAレベルは低い傾向にあった。(5)食道癌組織中のMT-IIAのmRNAレベルは、CDDPによる増殖抑制率と負に相関する傾向にあった。