ヒト食道癌におけるRT-PCR法を用いた制癌剤耐性関連遺伝子の発現量測定の意義

RT-PCR检测人食管癌抗癌耐药相关基因表达水平的意义

• 批准号: 06671305
• 负责人: 小澤 壯治
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06671305/
• 关键词: 食道癌; RT-PCR法; 制癌剤耐性

1.材料と方法:(1)食道癌をはじめとする6種類の扁平上皮癌細胞株、および食道癌の内視鏡生検材料を用いた。(2)GST-π、mdr-1、MT-IIAに対するPCRプライマーを作製した。(3)制癌剤に対する感受性試験はMTTアッセイを用いた。(4)遺伝子発現量の定量はNorthern blot法とRT-PCR法を用いた。2.結果:(1)癌細胞と臨床組織より得られたtotal RNAに対して、RT-PCR法を行い、GST-π、mdr-1、MT-IIAに対応する435bp,290bp,179bpの大きさのPCR産物が得られた。これらは、プライマーの設計時に予想した大きさであった。(2)PCR産物と至適PCRサイクル数をそれぞれのプライマーについて求めた。(3)癌細胞株のCDDP耐性は、GST-π、MT-IIAのmRNAレベルと、ADM耐性はMT-IIAのmRNAレベルと正の相関を示した。(4)ヒト食道癌組織中のmdr-1mRNAレベルは正常粘膜に比べて高く、逆にGST-π、MT-IIAのmRNAレベルは低い傾向にあった。(5)食道癌組織中のMT-IIAのmRNAレベルは、CDDPによる増殖抑制率と負に相関する傾向にあった。

1. Materials and methods: (1) the cell lines of esophageal cancer, such as flat epithelial carcinoma, and the raw materials of esophageal cancer were used. (2) GST- π, mdr-1, MT-IIA, and so on. (3) to make cancer, we need to know about the receptivity of MTT. (4) quantitative Northern blot method and RT-PCR method. two。 Results: (1) the tissue samples of cancer cells were successfully detected by total RNA assay, RT-PCR assay, GST- π, mdr-1, MT-IIA assay, 435bp PCR assay, 290bp DNA sequence. You may want to do a lot of work during the design of the equipment and equipment. (2) PCR the number of items from the PCR to the count. (3) CDDP tolerance, GST- π, MT-IIA mRNA tolerance and ADM tolerance of cancer cell lines MT-IIA tolerance mRNA tolerance were positive. (4) in esophageal cancer tissues, the expression of mdr-1mRNA protein in normal mucosa was higher than that in normal esophagus cancer, while the expression of GST- π and MT-IIA protein in esophageal cancer tissue was lower than that in normal esophagus cancer tissue. (5) the colonization inhibition rates of MT-IIA, mRNA and CDDP in esophageal cancer tissues were significantly higher than those in esophageal cancer tissues.