エンドセリンの代謝調節に関与する酵素の生化学的,組織化学的解析

参与内皮素代谢调节的酶的生化和组织化学分析

• 批准号: 06672214
• 负责人: 森本 史郎
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Osaka University of Pharmaceutical Sciences
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06672214/
• 关键词: エンドセリン-1; 変換酵素; 金属プロテアーゼ; フォスフォラミドン; 摘出潅流標本

これまで我々は、培養血管内皮細胞を用いた実験成績から生理的に重要なエンドセリン(ET)変換酵素(ECE)は膜結合型のフォスフォラミドン感受性金属プロテアーゼあることを報告してきた。本研究ではまず、ラットの各組織からそれぞれの膜分画を調製し、合成big ET-1とインキュベートすることにより、ECEの組織分布を調べた。その結果、ECEの比活性値は腎臓において最も高く、次いで、肺であった。以下、脾臓>下垂体>肝臓>副腎>心臓>脳の順に高値を示した。したがって、ECEは生体内に広く存在するが、その中でも、腎臓と肺はエンドセリン産生の活発な組織であることが示唆され、実際にこれらの組織にET-1 mRNA及びET-1ペプチドが多いという成績に一致した。上記の結果に基ずいて、肺及び腎臓に存在するECEを部分精製し、それらの生化学的諸性質を比較検討した。肺の膜分画に存在するECEは分子量約45kDaのフォスフォラミドン感受性金属プロテアーゼであり、培養血管内皮細胞に存在するECEと同一の酵素であることが示唆された。一方、腎臓には、フォスフォラミドン感受性及び非感受性の2種のECEが存在していることを明らかにした。精製した高分子量のECE(約450kDa)はフォスフォラミドン非感受性であり、その酵素学的並びに生化学的性質は既知酵素のエンドペプチターゼ-2に極めて類似していた。低分子量のECE(約150Dka)は、フォスフォラミドン感受性の金属プロテアーゼであったが、培養血管内皮細胞や肺に存在する同種のECEとは分子量の点で異なっていた。さらに本研究では、ET-1の産生調節に関与するプロテアーゼの機能的役割をラット肺及び腎臓の摘出潅流標本を用いて調べた。その結果、いずれの臓器においてもフォスフォラミドン感受性金属プロテアーゼがbig ET-1に作用してET-1を生成し、本ペプチドの昇圧反応等の生理作用発現に重要な役割を果たしていることが明らかになった。また、ラット腎臓ではET-1の分解にneutral endopeptidase 24.11が関与していることが示唆された。

Therefore, we report on the practical results of using it in culturing vascular endothelial cells and the discovery of a physiologically important Endenserin (ET) converting enzyme (ECE) and a membrane-bound, Fumigrandin-sensitive metal protein. In this study, the tissue distribution of ECE was modulated and synthesized by large ET-1. The result is that ECE activity is the highest, the lowest and the highest. The following is a list of the highest values of the spleen> pituitary> liver> kidney> heart> kidney. The expression of ET-1 mRNA and ET-1 mRNA in the living tissues of ECE were consistent. The results described above are a comparative study of the biochemical properties of the liver, lung and kidney. The presence of ECE in lung membranes with molecular weight of about 45kDa and the presence of ECE in cultured vascular endothelial cells indicate the presence of the same enzyme. There are two kinds of ECE: one is sensitive, the other is non-sensitive. High molecular weight ECE(about 450kDa) is purified from the enzyme and its biochemical properties. Low molecular weight ECE(about 150Dka) is sensitive to metals and has different molecular weights in cultured vascular endothelial cells and lungs. In this study, ET-1 was used to regulate the production and function of lung and kidney. As a result, the sensitive metal layer has a large ET-1 effect, and the physiological effect of this layer is very important. The neutral endopeptidase 24.11 of ET-1 is related to the decomposition of ET-1.

项目成果

Kazuhiro Hisaki: "Conversion of big ET-1 in the rat lung:role of phosphoramidon sensitive endothelin-1-converting enzyme" Am.J.Physiol.266. H422-H428 (1994)

Kazuhiro Hisaki：“大鼠肺中大 ET-1 的转化：磷酰胺敏感性内皮素-1 转换酶的作用”Am.J.Physiol.266。

Katsuya Fujita: "Phosphoramidon-sensitive conversion of big endothelin-1 and degradation of endothelin-1 in rat kidney" Hypertension. 24. 227-233 (1994)

Katsuya Fujita：“大鼠肾脏中大内皮素 1 的磷酰胺敏感性转化和内皮素 1 的降解”高血压。