標的遺伝子組換えによるDNA修復酵素遺伝子の機能の解析

通过靶向基因重组分析DNA修复酶基因的功能

• 批准号: 06680668
• 负责人: 續 輝久
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06680668/
• 关键词: 標的遺伝子組換え; 胚性幹細胞(ES細胞); ジーン・ターゲティング; DNA修復酵素; 相同的組換え; 変異マウス

強力な発癌剤であるニトロソグアニジンなどのアルキル化剤や放射線は、細胞のDNAに様々な傷を生じ、その傷のあるものは、細胞を癌化させる突然変異を誘起することが明かにされている。アルキル化剤によってDNA上に生じた傷を修復する酵素として、O^6‐メチルグアニンDNAメチルトランスフェラーゼ(MGMT)が知られており、ヒトの癌細胞由来株の中にはこの酵素を欠損するものが多く存在する。DNAの傷と突然変異および発癌の関連を明かにし、その過程を分子レベルで明かにすることを目的に、標的遺伝子組換えの手法によりMGMT遺伝子の変異細胞・変異マウスを作製する実験を試みた。(1)マウスMGMT遺伝子の第2エクソンの翻訳領域内にG418耐性のマーカーを挿入するターゲティング・ベクターを構築し、これをマウスES細胞に導入後、ポジティブ・ネガティブ選別で生えてきたコロニーを解析し、目的とする複数の細胞クローンを得た(ヘテロ)。(2)これら細胞株を高濃度のG418存在下に培養を行ない、対立遺伝子の療法が不活性した細胞株(ホモ)を単離した。(3)また対立遺伝子の片方の遺伝子を不活化した細胞をマウスの胚盤胞に導入し、キメラマウスを経て変異マウス(ヘテロ接合体及びホモ接合体)を樹立した。現在得られた変異細胞株(ヘテロ・ホモ)については、正常細胞と比較して(1)各種アルキル化剤に対する感受性(2)自然及びアルキル化剤処理による突然変異率の解析を行っている。また変異マウス系統についてはコロニーを確率している段階で、欠損個体における種々の生物学的指標や突然変異率・発がん率の検討を行うことを計画している。

It is clear that powerful cancer-producing agents such as anticancer agents and radiation can cause damage to the DNA of cells, and that sudden changes in cells can cause cancer. The presence of enzymes for repair of DNA damage caused by DNA damage (MGMT) is known to occur in the origin of cancer cells. DNA damage, mutation and cancer development are related to molecular mutation, target mutation and gene transformation. MGMT gene mutation and mutation are controlled. (1)G418 resistance in the 2nd generation of MGMT gene was analyzed and the target was obtained after the introduction of ES cells. (2)These cell lines were cultured in the presence of high concentrations of G418 and isolated from inactive cell lines for treatment of the virus. (3)The cells in the cytoplasm are not activated. The cells in the cytoplasm are introduced into the cytoplasm. Now we have obtained the results of comparing different cell strains with normal cells.(1) Sensitivity to various kinds of different chemical agents.(2) Analysis of sudden variation rate in natural and different chemical agents. The biological index of the species, the sudden change rate, the development rate and the investigation of the system are discussed in this paper.

项目成果

Hiroshi Hayakawa: "Generation and elimination of 8‐oxo‐7,8‐dihydro‐2′‐depxyguanosine 5′‐triphosphate,a mutagenic substrate for DNA synthesis,in human cells." Biochemistry. 34. (89-95)

Hiroshi Hayakawa：“人类细胞中 DNA 合成的诱变底物 8-oxo-7,8-diHydro-2-depxyguanosine 5-三磷酸的生成和消除。（89-95）。

Kenji Ihara: "Requirement of the Pro‐Cys‐His‐Arg scquence for O^6‐methylguanine‐DNA methyltransferase activity revealed by saturation mutagencsis with negative and positive screening." Molecular General Genetics. 243. 379-389

Kenji Ihara：“通过阴性和阳性筛选的饱和诱变揭示了 O^6-甲基鸟嘌呤-DNA 甲基转移酶活性的 Pro-Cys-His-Arg 序列的要求。”243. 379-389。

Toru Ishibasi: "Intracellular localization and function of DNA repair methyltransferase in human cells." Mutation Research. 315. 199-212

Toru Ishibasi：“人类细胞中 DNA 修复甲基转移酶的细胞内定位和功能。”

Derrick E.Rancourt: "Genatic interaction between hoxb‐5 and hoxb‐6 is revealed by nonallelic noncomplementation." Genes & Devalopment. 9. 108-122

Derrick E.Rancourt：“hoxb-5 和 hoxb-6 之间的基因相互作用是通过非等位基因非互补揭示的。”9. 108-122

Masato Furuichi: "Genomic structure and chromosome location of the human mut Thomologue gene MTH1 encoding 8‐oxo‐dGTPase for prevention of A:T to C:G transversion." Genomics. 24. 485-490

Masato Furuichi：“编码 8-oxo-dGTPase 的人类突变同源基因 MTH1 的基因组结构和染色体位置，用于预防 A:T 到 C:G 颠倒基因组学。”