分裂酵母の2つのCENP-Bホモログ、Abp1、Cbhの機能解析

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1. 研究目的:ヒトセントロメアDNA結合タンパク質CENP-Bは染色体の高次構造とセントロメアの機能を結びつける重要な因子であるが、哺乳類細胞では遺伝解析ができないために必ずしもその解析は進んでいない。分裂酵母にはCENP-Bと優位な相同性を有するAbp1、Cbhの2種類の蛋白質が存在する。私はすでにAbp1がDNA複製の開始及び染色体の分配に関与することを明らかにし、Abp1が染色体の高次構造の形成に関与していると考えている。この考えに基づいて、本研究においてAbp1,Cbhの機能について詳細に解析を行う。2. 研究成果:(1)abp1,cbh二重破壊株およびそれぞれの単独破壊株の解析から、両タンパク質が重複した機能を持つことを明らかにした。(2)セントロメア領域のサイレンシングに対するabp1,cbh遺伝子破壊の効果を検討し、どちらの遺伝子破壊株でもセントロメアでのサイレンシングが弱くなっていることから、セントロメア領域のへテロクロマチン形成に両遺伝子産物が関与していることがわかった。(3)Abp1をbaitとしたTwo-hybrid screeningの結果、出芽酵母chromatin remodeling因子のサブユニットの一つSnf5ファミリーに入る新規遺伝子をクローニングし仮にAbp1-AP3と名付けた。この因子は出芽酵母のセントロメア領域のクロマチン構造形成に関与するRSC複合体の構成成分sfh1と高い相同性をしめす。Abp1-AP3の遺伝子破壊株はG2停止の表現型を示し、RSCと同様のchromatinremodeling factorがAbp1と相互作用を通じてセントロメアでのクロマチン構造形成に関与している可能性がある。(4) 分裂酵母のゲノムDNAデーターベースの検索の結果、もう一つのCENP-BホモログCbh3が見つかった。以上の結果は、分裂酵母CENP-Bホモログ蛋白質がセントロメア領域のクロマチン高次構造形成に関与することを強く示唆している。