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初期胚糖鎖抗原-1を生合成するフコース転移酵素のクローニング

生物合成早期胚胎碳水化合物抗原1的岩藻糖基转移酶的克隆

基本信息

批准号：
06680725
负责人：
成松久
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Soka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

糖鎖抗原は、糖転移酵素の逐次的な反応により生合成される。初期胚表面の糖鎖構造は、初期胚糖鎖抗原-1(SSEA-1)に代表されるように、胚発生の段階特異的に劇的に変化し、細胞間認識物質として機能していることが以前より指摘されてきた。SSEA-1抗原の抗原エピトープであるLewisx(Le^X)構造(Galβ1-4(Fucα1-3)GlcNAcβ1-3-R)の生合成に関与する3種類の糖転移酵素のうち、α1-3フコース転移酵素(α1-3Fuc-T)の遺伝子をクローニングする目的で、昨年度より以下の実験を遂行してきた。現在までに互いにきわめて相同性の高い5種のα1-3Fuc-T遺伝子(Fuc-TIII,IV,V,VI,VIIと命名されている。)がクローニングされている。それぞれのα1-3FucTのmRNAの各種組織における発現の分布が解析されてきた。Fuc-TIIIは、いわゆる血液型のルイス抗原を合成する酵素で、消化管上皮細胞やそれ由来の癌細胞に発現されていることを、我々は証明したきた。SSEA-1抗原が強陽性であるマウス胚性腫瘍細胞F9細胞には、いずれのα1-3FucT遺伝子も発現しておらず、これら既知のα1-3FucT遺伝子とはハイブリダイズしない未知のα1-3FucT遺伝子が存在し、それが初期発生において機能していることを示唆した。昨年度、科研費一般Cの補助金にて以下の研究を行った。SSEA-1抗原を多量に発現している未分化のF9細胞のmRNAより、Bリンパ球系での発現ベクター(pAMo)をもちいて、約100万個の独立クローンよりなるcDNAライブラリーを作成した。このcDNAライブラリーからのプラスミドDNAを、EBウイルス形質転換B細胞株ナマルバ細胞にトランスフェクトし、G418にて選択して安定導入細胞株を作製した。これを抗SSEA-1抗体にてFITC染色し、FACSにてSSEA-1抗原陽性の細胞を選別した。Hirt法にて、これらの細胞よりプラスミドDNAを回収し、E.coliを形質転換してプラスミドクローンとした。現在、このプラスミドクローンの解析を続行中である。

Sugar lock antigen, sugar shift enzyme and sequential reverse transcription synthesis The early embryo glycan lock antigen-1 (SSEA-1) represents the early embryo glycan lock structure, the early embryo glycan lock antigen-1 represents the early embryo glycan lock antigen-1, the early embryo glycan lock antigen-1 represents the early embryo glycan lock antigen-1, and the early embryo glycan lock antigen-1 represents the early embryo glycan lock antigen-1. The synthesis of SSEA-1 antigen is related to the synthesis of three kinds of glycosyltransferase, α1 -3 glucosyltransferase (α1-3Fuc-T) and its gene. 5 species of α1- 3 Fuc-T genes (Fuc-TIII,IV,V,VI,VII) with high identity are named.がクローニングされている。The distribution of α1-3FucT mRNA in various tissues was analyzed. Fuc-TIII is a blood type antigen that can be synthesized by enzymes, digestive tract epithelial cells, and cancer cells. SSEA-1 antigen is strongly positive in F9 cells, and α1- 3 FucT gene is present in F9 cells. α1 - 3 FucT gene is known to exist in F9 cells, and α1 - 3 FucT gene is unknown in F9 cells. The following research grants were paid for in the past year. SSEA-1 antigen was expressed in large quantities in undifferentiated F9 cells, and mRNA expression and protein expression in the B-cell lineage were detected. About 1 million independent cDNA fragments were produced. This cDNA fragment was cloned into DNA, EB, and transformed into B cell lines. G418 was selected and stably introduced into B cell lines. The anti-SSEA-1 antibody was stained with FITC and the SSEA-1 antigen positive cells were selected by FACS. Hirt method, the cell line, the DNA, the E.coli, the DNA, the DNA. Now, this is the first time I've seen this.