ヒトEC細胞の分化に伴う糖転移酵素の発現の解析-フコース転移酵素を中心に-

人EC细胞分化过程中糖基转移酶的表达分析 - 聚焦岩藻糖基转移酶 -

• 批准号: 06771363
• 负责人: 加藤 真也
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06771363/
• 关键词: 子宮体癌; フコース転移酵素; モノクローナル抗体 MSN-1; Le遺伝子; PCR-RFLP法

(目的)我々の研究質では、子宮体癌由来培養細胞株SNGIIを免疫原として作成したモノクローナル抗体MSN-1が子宮体癌組織と高率に反応することから、その認識抗原であるルイスbの構築に必要なFT-III遺伝子(=Le遺伝子)の変化についてヒトEC細胞を用いて検索してきたが、実験方法の確立を目指して、まずは各種婦人科悪性腫瘍由来の培養細胞を用いて、そのゲノムDNAにおけるLe遺伝子の点突然変異を、PCR-RFLP法を用いて検出することとした。(対象)子宮頸癌由来培養細胞株(SKGIIIa、SKGIIIb)、子宮体癌由来培養細胞株(SNGII、Hec108)、卵巣癌由来培養細胞株(RMGII、RTSG)の6細胞を用いた。(方法)各種培養細胞より抽出したゲノムDNAをテンプレートとし、FT-III遺伝子に特異的なプライマーを設定し、PCR法を行った。そのプロダクトを、制限酵素PvuIIにて切断したフラグメントの検出により、点突然変異による劣性遺伝子型の一つであるle1を検出した。さらに異なるプライマーを用いてPCRを行い、制限酵素HindIIIにて切断することで、もう1つの劣性遺伝子型le2を検出した。(結果)RMGIIは、Le/le1、RTSGは、Le/le2の各々ヘテロ接合体であり、他の4細胞はLe/Leのホモ接合体であった。(考察)癌化にともなうFT-III遺伝子の何らかの変化が示唆されていることから、leのホモ接合体である細胞株を対象とし、今回と同様のPCR-RFLP法を用いて検索することにより、in vivoでの癌化にともなう遺伝子上の変化と、それより引き起こされる表現形質の変化の解明の端緒となり得ると思われた。

Objective: To establish a method for the identification and construction of the necessary FT-III gene for the identification of antigens in uterine carcinoma-derived culture cell line SNGII. This study was carried out using cultured cells from various female genital tumors, DNA sequencing and PCR RFLP. 6 cell lines derived from cervical cancer (SKGIIIa, SKGIIIb), uterine somatic cancer (SNGII, Hec108) and ovarian cancer (RMGII, RTSG) were used. (Method) DNA extraction from various cultured cells, FT-III gene selection, PCR method PvuII is a restriction enzyme. It can be used to detect the presence of a defective gene. In addition, we use PCR to detect the presence of the defective gene type le2 in the presence of the restriction enzyme HindIII. (Results)RMGII, Le/le1, RTSG, Le/le2, Le/le 4, Le/le 4, Le/Le 4 The expression of FT-III gene in cancer cells was studied by PCR-RFLP method. The results showed that the expression of FT-III gene in cancer cells was different from that in cancer cells.