ラセミ体修復機構(カルボキシルメチルトランスフェラーゼ)欠損マウスの作製

产生外消旋修复机制（羧甲基转移酶）缺陷的小鼠

• 批准号: 06833017
• 负责人: 白沢 卓二
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Tokyo Metropolitan Institute of Gerontology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06833017/
• 关键词: アルツハイマー病; 発現異常; イソアスパルチルメチルトランスフェラーゼ; ラセミ体; ノックアウトマウス; キメラマウス; ES細胞

我々は、アルツハイマー病の神経変性に伴う分子異常を遺伝子工学的手法を用いて解析するために、アルツハイマー病(AD)で異常発現する遺伝子をディファレンシャル・ハイブリダイゼーション法を用いて、複数単離同定した。イソアスパルチル・メチルトランスフェラーゼ(PIMT)はADで異常発現を認めた分子の1つで、イソ体(D体)アスパラギン酸(L-isoAsp/D-Asp)を有する蛋白質(ラセミ体)を基質に、これらの基質蛋白質の分解または修復に関与している酵素と考えられている。本研究課題ではアルツハイマー病におけるPIMTの発現異常がAD脳における神経の変性にどのように関与しているのかを分子生物学的に解析する為に、イソアスパルチル・メチルトランスフェラーゼを欠損したマウス(PIMTノックアウトマウス)の作成を試みた。マウスのゲノムよりPIMT染色体遺伝子を単離し、エクソク・イントロン構造を決定した。エクソン2、3をネオマイシン遺伝子で置換するノックアウトコンストラクトを作成した。コンストラクトを129由来のES細胞に遺伝子導入し、相同組換えによりPIMT染色体遺伝子がネオマイシンで置換されたESクローン(ES♯84)を樹立した。このクローンをC57Black/6胚に注入し、キメラマウスを作成した。キメラマウスは更に、C57Black/6に戻し交配する事により、変異がgermlineに移行したヘテロマウスを確立する事に成功した。ヘテロマウスの交配により、ホモマウスを作成した。ホモマウスは予想された頻度で発生し、個体発生は正常であった。ホモマウスはサザンブロット、およびウエスタンブロットにより、PIMT遺伝子に変異が導入されていることが確認された。現在、ホモマウスの表現形を解析中である。

The method of gene engineering for the abnormal occurrence of the disease is used for the analysis of the abnormal occurrence of the disease. The protein (L-isoAsp/D-Asp) that is present in the matrix and the enzyme that is involved in the breakdown and repair of the matrix protein are identified in the protein (L-isoAsp/D-Asp) that is involved in the abnormal occurrence of AD. This research topic is to analyze the abnormal occurrence of PIMT in molecular biology, and to try to create it (PIMT). PIMT chromosome sequence analysis and analysis 2, 3, 4, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 10, 11, 12, 13, 12, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 10 129. ES cells were introduced into the genome, and the same DNA sequence was established in ES cells (ES 84). C57Black/6 is injected and processed. C57Blackヘテロマウスの交配により、ホモマウスを作成した。The frequency of birth and individual birth is normal.ホモマウスはサザンブロット、およびウエスタンブロットにより、PIMT遗伝子に変异が导入されていることが确认された。Now, in the analysis of the expression of.

项目成果

Shirasawa,T.et al.: "Protein L-isoaspartyl methyltransferase:developmentally regulated gene expression and protein localization in the central nervous system of aged rat." Neurosci.Lett. 187. 1-4 (1995)

Shirasawa,T.et al.：“蛋白质 L-异天冬氨酰甲基转移酶：老年大鼠中枢神经系统中发育调节的基因表达和蛋白质定位。”

Ohno,H.et al.: "Targeted disruption of the CD3 eta locus causes high lethality in mice:modulation of Oct-1 transcription on the opposite strand" EMBO J.13(5). 1157-1165 (1994)

Ohno, H. 等人：“CD3 eta 位点的靶向破坏导致小鼠高致死率：相反链上 Oct-1 转录的调节”EMBO J.13(5)。

Tomiyama,T.et al.: "Racemization of Asp23 residue affects the aggregation properties of Alzheimer amyloid beta protein analogues" J.Biol.Chem..269(14). 10205-10208 (1994)

Tomiyama, T. 等人：“Asp23 残基的外消旋化影响阿尔茨海默病淀粉样蛋白 β 蛋白类似物的聚集特性”J.Biol.Chem..269(14)。

Mori,H.et al.: "Racemization:Its biological sinificance on neuropathogenesis of Alzheimer's Disease." Tohoku J.Exp.Med.,. 174. 251-262 (1994)

Mori,H.等人：“外消旋化：其对阿尔茨海默病神经发病机制的生物学意义。”

Shirasawa,T.et al.: "Molecular cloning and evolutional analysis of a mammalian homologue of the Distal-less 3(Dlx-3)homeobox gene." FEBS Lett.351(3). 380-384 (1994)

Shirasawa,T.et al.：“Distal-less 3(Dlx-3)同源盒基因的哺乳动物同源物的分子克隆和进化分析。”