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GroE依存基質タンパク質を用いたフォールディングスイッチの作製

使用 GroE 依赖性底物蛋白创建折叠开关

基本信息

批准号：
22870016
负责人：
藤原慶
金额：
$ 1.84万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
财政年份：
2010
资助国家：
日本
起止时间：
2010 至 2011
项目状态：
已结题

项目摘要

近年、生物の材料を組み合わせて新しい機能の実現を目指す合成生物学が勃興し、生物の個々の機能を取り出して回路化する試みが行われてきている。この回路化にはスイッチによるタンパク質の発現制御が重要である。現在までに、リプレッサーのような転写因子を用いたスイッチの他、低分子化合物を結合するRNAを用いたリボスイッチ、RNAに結合するタンパク質を用いたRNPスイッチなどが報告されている。これらのスイッチから発現するタンパク質は、いずれもリボソームで翻訳された後、立体構造になる過程(フォールディング過程)を経る。したがって、タンパク質のフォールディングを制御すれば、既存のものとはターゲットは異なり、働く分子機械の機能を直前で制御可能なスイッチとなる。そこで、本研究ではフォールディングスイッチを作製する。本年度は、比較的小さなGroEが存在しないとフォールディングできないタンパク質(FtsE、YqaB)の下流に転写因子tetRやGFPを融合しGroE依存性を解析した。結果、これらの融合タンパク質はGroE存在下でも正常なフォールディングができないことが明らかになった。今後、この理由を解明することで、タンパク質のフォールディング機構に対する新たな知見が得られることが期待される。また、生体にそなわっているフォールディングスイッチを利用した合成生物学を展開した。GroE発現抑制状態では塩要求が強くなること、特定のプロモーターが活性化されることを利用し、培地中の塩濃度をGFPの蛍光に変換する『定量的な』塩濃度センサー大腸菌を作製することに成功した。本成果により、フォールディングスイッチが実用的なものであることを示した。

In recent years, the new mechanism of biomaterial complex has been able to detect the impact of synthetic biology, and two biological mechanisms have been able to access the loopback of biological materials. The loopback is very important because it is important to control the situation. Now, in order to get rid of each other, we use the combination of low molecular weight compounds (RNA), low molecular weight compounds (LMCs), low molecular weight compounds (RNA), low molecular weight compounds (LMCs), low molecular weight compounds (LMCs). Do you want to know that after you have completed the training session, you will need to make a three-dimensional analysis of the whole process. The equipment, equipment The purpose of this study is to improve the performance of the students in this study. In this year's GroE, there is a combination of GroE dependency parsing, writing factor tetR, GFP and GroE dependency analysis. Results: the results show that the fusion system is in the presence of the GroE. This is not the case. In the future, the reasons will be explained, and the organization will be informed of the new information and anticipate the news. In vivo, in vivo and in vivo. GroE has shown that the inhibition of the status requires that it is necessary to make use of the specific activity, the temperature of the GFP, the amount of light in the culture, and the quantity of bacteria in the culture. In this paper, the results show that the results show that they are used in the production of this product.