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新規免疫抑制因子MAY-Iの臓器移植治療への応用とその免疫抑制機序

新型免疫抑制因子MAY-I在器官移植治疗中的应用及其免疫抑制机制

基本信息

批准号：
14370363
负责人：
内田広夫
金额：
$ 4.48万
依托单位：
Dokkyo Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

平成14年度は新規免疫抑制タンパク質MAY-Iを用いて、in vivoおよびin vitroの研究を進めた。ラットMAY-I遺伝子を発現するplasmidをCOS7細胞にトランスフェクションし組換えタンパク質を作製した。10Lの細胞上清から約50μgのタンパク質が精製された。このタンパク質を混合リンパ球試験(MLR)に加えると容量依存性に反応を抑制した。MAY-Iはラットinter-alpha-inhibitory H4P heavy chain(H4P)のC末端を含むfragmentであるため、H4Pの組換えタンパク質とH4PでMAY-Iを含まないp-H4Pの組換えタンパク質を作製、精製してMLRに加えた。するとH4PはMLRを抑制したがp-H4Pは全くMLRを抑制しなかった。これからH4Pのアミノ酸配列の中でもMAY-Iに相当する部位が免疫抑制活性に重要であると考えられた。加えてMAY-IはH4Pと比較して免疫抑制活性が強いため、H4Pが切断されてMAY-Iになることでタンパク質の高次構造に変化がおき、より強力な免疫抑制作用を示しているのではないかと考えられた。大腸菌でも何種類かのplasmidで組換えタンパク質を作製しようとしたが、できなかったため、baculovirusを用いて組換えタンパク質を作製した。精製したタンパク質はMLRを抑制し生理活性を有することを確認した後にラット心移植モデルに投与を行った。現在まで症例数は少ないが心臓の生着を延長することがわかってきた。ヒトMAY-Iのクローニングを行い、同様に組換えタンパク質を作製した。ヒトMAY-IはヒトMLRを抑制した。来年以降は心移植モデルで生着延長効果を確認し、他のin vivoのモデルを用いてMAY-Iの効果を確認したい。さらにその免疫抑制機序を明らかにしたいと考えている。

In 2014, new regulations on immunosuppressive substances MAY-I were used and in vivo and in vitro research was carried out.ラットMAY-I's するplasmidをCOS7 cell にトランスフェクションし group replacement えタンパクquality をproduced した. 10L of cell supernatant contains approximately 50 μg of purified cell supernatant. The quality of the このタンパク mixed リンパ ball test (MLR) is added and the capacity dependence and reaction resistance are suppressed. MAY-Iはラットinter-alpha-inhibitory H4P heavy chain(H4P)'s C-terminal fragment contains fragment, H4P's group replacement fragment H4PでMAY-I まないp-H4Pのassembled えタンパクqualityをmade and refined してMLRにplusえた.するとH4PはMLRを suppresses したがp-H4P は全くMLRを suppresses しなかった. The immunosuppressive activity of the H4P acid compound in the MAY-I equivalent part is important. Added MAY-I and H4P, compared with strong immunosuppressive activity, H4P cut off, MAY-I and H4P. The high-order structure of でタンパク性に変化がおき, the strong immunosuppressive effect of よりているのではないかと卡えられた. What kind of coliforms are they made?できなかったため, baculovirus を Use いて group to replace えタンパクquality を Production した. The purified したタンパク性はMLRを inhibits the physiological activity of the することを and the したたにラットheart transplantation モデルにinvests in the を行った. Currently, the number of cases of the disease is small and the heart disease is growing and extending.ヒトMAY-Iのクローニングを行い, with the same 様に group replaced by えタンパquality をproduced した.ヒトMAY-IはヒトMLRを inhibits した. From next year onwards, it has been confirmed that the prolongation effect of heart transplantation is confirmed, and the effect of in vivo transplantation of MAY-I has been confirmed.さらにそのimmunosuppressive machine sequence を明らかにしたいと卡えている.