哺乳類GAL4/UASシステムの開発による時計遺伝子発振システムの解明

通过开发哺乳动物GAL4/UAS系统阐明时钟基因振荡系统

• 批准号: 12558092
• 负责人: 岡村 均
• 金额: $ 6.59万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12558092/
• 关键词: GAL4-UAS; mPer1プロモーター; 時計遺伝子; トランスジェニックマウス

この実験は、ショウジョウバエの遺伝子導入に良く用いられているyeastのGAL4-UASシステムを哺乳類で確立し、時計遺伝子・時計関連遺伝子と想定される遺伝子を自在にサーカディアンセンターである視交叉上核に発現させ得る系を確立する事を目的としている。これにより、ある特定の遺伝子を視交叉上核に過剰発現させる事ができ、行動リズムをモニターする事により、この遺伝子のサーカディアンシステムに及ぼす影響が測定できる。今年度、mPer1プロモーターにUAS及びGAL4をつないだDNAをもつトランスジェニックマウスの作成し、UASに対象とする遺伝子のcDNAをつないだDNAをもつトランスジェニックマウスをも作成した。遺伝子の導入は、熊本大学動物資源開発研究センターにおいて、マウス受精卵にDNAをマイクロインジェクションすることにより行ない、現在マウスができて尾部より抽出したゲノムDNAを、サザンハイブリダイゼーション法で遺伝子導入を確定した。得られたトランスジェニックマウスは、wild typeのマウスと掛け合わせ、数を増やしている最中である。mPer1プロモーターにUAS及びGAL4をつないだトランスジェニックマウスの系統については、GAL4遺伝子のコード領域をプローブとして、視交叉上核において適切な発現パターンを示すトランスジェニックマウスを以後の実験に使用する。対象とする系統については、時計遺伝子mPer1,mPer2,mPer3を作成した。

The GAL4-UAS system of mammalian is established in the early years of the development of the gene in the early years of the development of the gene in the early stages of development. The results show that: (1) the activity of the enzyme is related to the activity of the enzyme;(2) the activity of the enzyme is related to the activity of the enzyme;(3) the activity of the enzyme is related to the activity of the enzyme;(4) the activity of the enzyme is related to the activity of the enzyme;(5) the activity of the enzyme is related to the activity of the enzyme;(6) the activity of the enzyme is related to the activity of the enzyme;(7) the activity of the enzyme is related to the activity of the enzyme; and (8) the activity of the enzyme is related to the activity of the enzyme. This year, mPer1 is the first time that UAS and GAL4 have been selected for DNA analysis. The introduction of DNA from fertilized eggs was confirmed by Kumamoto University Animal Resources Development Research Center. The number of wild types of fish in the sea increased rapidly. mPer1, GAL4, UAS, GAL4, GAL 4, G For example, if the system is not complete, the timer elements mPer1,mPer2,mPer3 are created.

项目成果

Horikawa K. et al.: "Non-photic entrainment by 5-HT1A/7 receptor agonists accompanying with reduction of Per1 and Per2 expression."Journal of Neuroscience. 20巻. 5867-5973 (2000)

Horikawa K. 等人：“5-HT1A/7 受体激动剂的非光夹带伴随着 Per1 和 Per2 表达的减少。”《神经科学杂志》第 20 卷，5867-5973 (2000)。

Yagita K. et al.: "Dimerization and nuclear entry of mPER proteins in mammalian cells"Genes & Development. 14巻. 1353-1363 (2000)

Yagita K.等人：“哺乳动物细胞中mPER蛋白的二聚化和核进入”Genes & Development，第14卷，1353-1363 (2000)。

Yagita K. et al.: "Forskolin induces circadian gene expression of rPer1, rPer2 and dbp in mammalian rat-1 fibroblasts"FEBS Letter. 465巻. 79-82 (2000)

Yagita K. 等人：“Forskolin 诱导哺乳动物rat-1 成纤维细胞中 rPer1、rPer2 和 dbp 的昼夜节律基因表达”FEBS Letter。 465. 79-82 (2000)

Yan L. et al.: "Distribution and circadian expression of dbp in SCN and extra-SCN areas in the mouse brain."Journal of Neuroscience Research. 59巻. 291-295 (2000)

Yan L. 等人：“小鼠大脑 SCN 和 SCN 外区域 dbp 的分布和昼夜节律表达。”神经科学研究杂志 59. 291-295 (2000)

Yamaguchi S. et al.: "Role of DBP in the circadian oscillatory mechanism"Molucular and Cellular Biology. 20巻. 4773-4781 (2000)

Yamaguchi S. 等人：“DBP 在昼夜节律振荡机制中的作用”《分子和细胞生物学》第 20 卷，4773-4781 (2000)。