The Establishment of KL-6 Associated New Serum Markers Using High Sensitive Electrochemiluminescence Immunoassay.

使用高灵敏电化学发光免疫分析法建立 KL-6 相关新血清标志物。

基本信息

  • 批准号:
    13557051
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 9.02万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
  • 财政年份:
    2001
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    2001 至 2003
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

In 2003, we further improved the sensitivity of the screening method of hybridomas using M8 analyzer (IGEN Co., UK) and enabled shorter screening hours. In parallel, we repeatedly produced new hybridomas secreting monoclonal antibodies by fusing of murine myeloma cells and splenocytes from BALB/c mice previously immunized with various cancer cell lines.M8 analyzer is the machine for electrochemiluminescence immunoassay (ECLIA) applying electrochemiluminescence of Ruthenium complexes. ECLIA combined with reversed indirect sandwich assay (RISA), which we had previously established and had reported its utility, enabled approximately 1,000 times sensitivity and one sixth screening hours compared with enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) combined with RISA (RI-ELISA).By means of this new screening method, we could have selected sixteen new multiclonal antibodies that showed strong affinity to the pooled serum obtained from lung cancer or interstitial pneumonitis patients. We tried to clone these multiclonal antibodies after exception of non-specific antibodies. Hybridomas, however, originally have weak proliferation ability and instability. These defects, therefore, induced loss of antibody secreting ability or cell death of many hybridomas in the course of cloning or freezing/thawing. Although only few monoclonal antibodies could finally be produced, some of them probably recognize different epitopes from that of original KL-6 antibody.Despite of considerable long period to establish this new screening method, we could have successfully established extremely high sensitive screening method which requires only short hours. This new method must contribute to establish new monoclonal antibodies that more sensitively and specifically react with lung cancer or interstitial pneumonitis patients' serum than original KL-6 antibody
2003年,我们利用英国iGen公司的M8分析仪进一步提高了杂交瘤筛查方法的灵敏度,并缩短了筛查时间。同时,我们通过融合小鼠骨髓瘤细胞和先前用各种癌细胞株免疫的BALB/c小鼠的脾细胞,反复产生分泌单抗的杂交瘤细胞。M8分析仪是用于电化学发光免疫分析(ECLIA)的机器,应用Ru络合物的电化学发光。ECLIA结合反向间接夹心法(RISA)是我们先前建立并报道了其实用价值的方法,与酶联免疫吸附结合RISA(RI-ELISA)相比,其敏感性约为1,000倍,筛选时间约为1/6小时。通过这种新的筛选方法,我们可以筛选出16种与肺癌或间质性肺炎患者的混合血清具有很强亲和力的新多克隆抗体。除非特异性抗体外,我们试图克隆这些多克隆抗体。然而,杂交瘤最初具有较弱的增殖能力和不稳定性。因此,这些缺陷导致许多杂交瘤在克隆或冷冻/解冻过程中失去抗体分泌能力或细胞死亡。虽然最终产生的单抗很少,但其中一些可能识别与原始KL-6抗体不同的表位,尽管建立这种新的筛选方法需要相当长的时间,但我们可以成功地建立起只需很短时间的极高灵敏度的筛选方法。这一新方法必须有助于建立与肺癌或间质性肺炎患者血清反应比原来的KL-6抗体更敏感和更特异的新的单抗。

项目成果

期刊论文数量(65)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Shimizu Y: "Increased Plasma Ghrelin Level in Lung Cancer Cachexia"Clin Cancer Res. 9・2. 774-778 (2003)
Shimizu Y:“肺癌恶病质中血浆 Ghrelin 水平升高”《临床癌症研究》9·2(2003 年)。
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
河野 修興: "呼吸器疾患とKL-6(Annual Review 呼吸器 2003)"中外医学社,東京. 282 (2003)
Nobuoki Kono:“呼吸系统疾病和 KL-6(呼吸系统年度回顾 2003)”Chugai Igakusha,东京 282 (2003)。
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
Katayama H: "Production of eosinophilic chemokines by normal pleural mesothelial cells"Am I Respir Cell Mol Biol. 26・4. 398-403 (2002)
Katayama H:“正常胸膜间皮细胞的嗜酸性趋化因子的产生”Am I Respir Cell Mol Biol.26·4(2002)。
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
Miyazu Y: "Endobronchial ultrasonography in the diagnosis and treatment of relapsing polychondritis with tracheobronchial malacia."Chest. 124・6. 2393-2395 (2003)
Miyazu Y:“支气管内超声诊断和治疗伴有气管支气管软化症的复发性多软骨炎”124・6(2003)。
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
Hashida H: "Integrin α3 expression as a prognostic factor in colon cancer : association with MRP-1/CD9 and KAI1/CD82"Int J Cancer. 97・4. 518-525 (2002)
Hashida H:“作为结肠癌预后因素的整合素α3表达:与MRP-1/CD9和KAI1/CD82的关联”Int J Cancer 97・4 (2002)。
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