精子形成におけるストレスと精細胞死の関連および分子機構の解明

阐明精子发生过程中应激与精子细胞死亡的关系及分子机制

基本信息

批准号：
15591670
负责人：
小島聡子
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Chiba University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2005
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15591670/
关键词：
精子形成ストレスアポトーシス BCL6 MAPK ノックアウトマウス

项目摘要

男性不妊症の原因として、無精子症や乏精子症が挙げられる。近年の分子生物学的研究の飛躍的向上に伴い精子の分化発達のメカニズムが徐々に解明されている。しかし、精細胞死の明らかな機序はいまだ不明である。精巣におけるアポトーシス関連遺伝子としてBax, Bcl-2,Bcl-x、また、精巣分化に必須の遺伝子としてHSP 70-2などが報告されているが精巣分化のコントロールにおける遺伝子機能とその相互関係については、完全には解明されていない。本研究では、ストレスの与える精巣への影響を分子生物学的に解明することを目的とした。(1)Bc16ノックアウトマウスと正常マウスの精巣から凍結切片を作成し、減数分裂中期の精母細胞、パキテン細胞を、マイクロダイセクション装置を用いて分離採取する技術を習得した。さらに、それらの標本からPCR法にて精細胞のlabeled-cDNAを作成した。今後、マイクロアレイを用いてそれぞれの分化階段の細胞における遣伝子発現の比較検討を行う予定である。(2)熱ストレスを与えた精細胞におけるアポトーシスの伝達経路をWestern blotを用いて検討した。Bax, MAPK P38のPhospholylationを認めた。BCL2,p53については明らかな差を認めなかった。今後はさらに、マイクロダイセクション装置を用いて精巣凍結標本から精細胞を分離採取し、精母細胞におけるアポトーシス関連遺伝子の発現の変化をPCR法を用いて検討する予定である。

男性不育症的原因包括无植物和寡头症。近年来，随着分子生物学研究的快速改善，精子分化发育的机制已逐渐阐明。但是，精子死亡的明显机制仍然未知。 BAX，BCL-2和BCL-X已报告为睾丸中与凋亡相关的基因，HSP 70-2是睾丸分化的必不可少的基因，但是尚未完全理解基因功能及其在睾丸分化控制中的相互作用。这项研究旨在以分子生物学方式阐明压力对睾丸的影响。（1）我们获得了从BC16敲除小鼠和正常小鼠睾丸产生冷冻切除术的技术，并使用微切除装置分离和收集减数分裂的精子细胞和Pachytene细胞。此外，通过PCR从这些标本中制备了精子细胞的标记-CDNA。将来，我们将使用微阵列进行每个分化步骤中骨骼基因的表达进行比较。（2）使用Western印迹研究了热应激精子细胞中凋亡的途径。 BAX，MAPK P38磷酸化。对于BCL2和P53，没有观察到明显的差异。将来，将使用微分解装置从冷冻睾丸样品中分离并收集精子细胞，并将使用PCR研究精子细胞中与凋亡相关基因的表达的变化。