Homeostatic regulation of metabolic organs by splicing factors and its clinical application

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動物実験としてはCWC22コンディショナルノックアウトマウスの表現型解析を行った。本年度は高脂肪食誘発性の肥満症モデルの解析を中心に検討した。解析項目としては各代謝臓器における病理解析、発現解析および死細胞蓄積の評価を検討した。CWC22の欠損により、上述のような肥満症における表現型は増悪化することが明らかとなった。また、骨髄由来マクロファージを単離して、如何なる生理的なプロセスにより上記mRNAスプライシングが制御されるか検討した。RNAseqによりスプライスバリアントの網羅解析も行い、ターゲットとなる遺伝子を複数同定した。同時に、エフェロサイトーシスやファゴサイトーシスの機能解析を行い、ターゲット遺伝子と細胞機能が一致することを確認している。このような機能に直結するターゲット遺伝子のいくつかはタンパク質に翻訳されることが明らかとなっており、当該バリアントを検出する目的で抗体を作成した。また、予備実験で検出されているCWC22ターゲットXについて、リコンビナントタンパク質をマクロファージ細胞ラインに導入し、分子レベルでメカニズムを検討した。Xならびにそのスプライシングバリアントは細胞内分布に差異があり、両者は細胞内で分子間相互作用を呈することが明らかとなった。さらに、病理解析で健常ならびに肥満症症例の脂肪組織におけるCWC22の活性を免疫組織化学的に検出する目的で、病理検体２７例を収集し、目下解析中である。同時に、海外から高BMIの検体も入手した。