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蘇類Physcomitrella patens宿主・ベクタ-系の開発

小立碗藓宿主载体系统的开发

基本信息

批准号：
03262203
负责人：
東江昭夫
金额：
$ 1.22万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-03262203/
关键词：
蘇類 Physcomitrella patens エレクトロポレ-ションホルモン GUS活性

项目摘要

1.Physcomitrella patens培養法の確立寒天培地はクノップ液を基本として、液体培地はMS培地にブドウ糖とクエン酸ソ-ダを添加して調製した。寒天培地上の原系体をブレンダ-で断片化したのち、液体培地に接種し、明所で攪拌しながら培養すると、10日後、植物体の重量は約50倍に達して増殖を停止した。液体培養では原系体の増殖が盛んで、組織分化はみられなかった。寒天培地へのオ-キシンの添加は原系体からロネマ及び芽への分化を促進し、サイトカイニンの添加は芽への分化を促進した。2.プロトプラストの形成法と再生法寒天培地上で生育した原系体を0.44Mマンニト-ル液に懸濁したのち、2%ドリセラ-ゼ処理によりプロトプラスト化ができた。生量1ー2gの原封体から約10^6ー10^7コのプロトプラストが形成された。プロトプラストを0.44Mマンニト-ル入りのクノップ液中で5日間23℃で培養後、毎日一度1/5量のクノップ液(マンニト-ルを含まない)を添加して、10日目に寒天平板に拡げ、さらに27℃で5日間保温したところコロニ-が形成された。再生途中の様子を顕微鏡観察したところ、先ず、球形の細胞の中央に隔壁ができ2細胞になり、その一方がさらに分列して原系体になることがわかった。3.エレクトロポレ-ションによる遺伝子の導入バイオラド社製のジ-ンパルサ-を用いて、プロトプラストの生存率が50%になる条件として、IμFで1200Vを設定した。nos,par,rulC,Ubiの各プロモ-タ-の下流にGUS遺伝子を連結したプラスミドをp.patensのプロトプラストに導入し、一過性のGUS活性を測定したところ、rulc,ubi,CaMv,nos,parの順にプロモ-タ-活性が強かった。

1.Physcomitrella patens method is used to make sure that the ground is cultivated in cold weather, and the liquid is used to cultivate the ground, and the liquid is used to cultivate the ground, MS, sugar, acid, acid, sour, sour In cold weather, the original plant was cultured in fragments, inoculated in liquid culture, and mixed with rice in cold weather. After 10 days, the weight of the plant was about 50 times as much as that of the plant. The original system of liquid culture was used to proliferate, and tissue differentiation was performed. In cold weather, add protoplasts and buds to promote differentiation, and add buds to promote differentiation. two。 In the cold weather, the method of regeneration was used to cultivate the earth in cold weather, the original system was 0.44m, the liquid was not in the liquid, and the growth rate was 2% in cold weather. The quantity of 1'2g original seal is about 10 ^ 6'10 ^ 7. After being incubated at 23 ℃ for 5 days, the temperature for 5 days is 23 ℃, and the temperature for 5 days is 23 ℃. In the process of regeneration, we observed that the cells in the center, next door, and one side in the middle of the regeneration were divided into four parts, namely, the original system. 3.