酵母RAS2蛋白質の活性調節機構

酵母RAS2蛋白活性调控机制

• 批准号: 01015068
• 负责人: 東江 昭夫
• 金额: $ 3.14万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Cancer Research
• 财政年份: 1989
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1989 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01015068/
• 关键词: GAP; GTP型ラス; GDP型ラス; IRA遺伝子; MSI1; Saccharomyces cerevisiae

1.酵母RAS蛋白機能の調節に係わる新しい遺伝子の性格づけ我々は、酵母RAS2の不活化に係わると考えられる遺伝子IRA1を同定した。ira1変異体は、RAS2を不活化できず、活性型RAS2が細胞内に蓄積し、cAMP濃度が上昇するために、熱ショックに対して感受性となる。ira1変異株の熱ショック感受性を相補する遺伝子を分離したところ、二種の新遺伝子が得られた。(1)IRA2:IRA1と高い相同性を示した。ira2破壊株は、ira1破壊株と同様の表現型を示した。遺伝学的解析結果は、IRA1とIRA2は協調して、RAS蛋白の不活化を促進していることを示唆している。(2)MSI1:IRA遺伝子と異なり、MSI1は、コピー数が高い条件で、活性型RAS、RAS2^<valー19>、変異をも抑圧する。トランスデューシンbetaと弱い相同性を示す。msi1破壊株は生育可能なので、必須遺伝子ではない。2.IRA1、IRA2の機能領域の限定IRA1蛋白の一部は、哺乳動物由来のras GTPase Activating Protein(GAP)活性ドメインと相同性を示した(既報)。IRA2遺伝子の各種欠失変異を造成し、強制的に酵母内で発現させて、ira1の相補活性を指標に、IRA2の活性ドメインを限定したところ、その中にGAP相同領域が含まれていた。GAPを酵母内で発現させると、ira1変異を相補した。この結果は、GAPが機能的にもIRA1と似ていることを示している。3.RAS蛋白のGTP型ーGDP型変換反応の調節IRA1、ira2、ira1・ira2および野生型中でRAS2あるいはRAS1を多量発現させ、さらに^<32>Pでラベルする。このような細胞からRAS蛋白を特異抗体を用いて沈降させ、RAS蛋白に結合しているグアニンヌクレオチドをPEIーセルローズTLCで分離した。予想通り、Ira^-株では、RAS・GTP型の割合が顕著に増加していた。

1. The yeast RAS protein mechanism can be used to determine the IRA1 of the new gene. The yeast RAS2 protein does not activate the yeast protein. Ira1, RAS2, active RAS2, intracellular accumulation, cAMP, susceptibility, sensitivity. The susceptibility of the ira1 strain was isolated from each other, and the two new strains were isolated. (1) the IRA2:IRA1 is similar in height and height. Ira2 broken strain and ira1 broken strain showed the same phenotype. The results of analysis, IRA1 IRA2 protocol and RAS protein inactivation were analyzed. (2) the number of MSI1:IRA cubes is higher than that of normal conditions, active RAS, RAS2 ^ & lt;val, 19gt; and so on. Please tell me that beta is weak and identical. The birth of the broken strain of msi1 may be abortive, and it must be aborted. In the field of 2.IRA1 and IRA2, the function of IRA1 protein is limited, and the origin of ras GTPase Activating Protein (GAP) activity of mammals is similar to that of mammals. All kinds of IRA2 spores are caused by the presence of microorganisms in yeast, the presence of ira1 in yeast, the activity of ira1, the activity of IRA2, and the same field of GAP in yeast. GAP yeast showed that there was no significant difference between ira1 and Saccharomyces cerevisia. The results show that the performance IRA1 of the GAP machine is similar to that of the computer system. 3.RAS protein, GTP, GDP, IRA1, ira2, ira1, ira2, wild type, RAS2, RAS1, large amount of protein, ^ & lt;32>P. The specific antibody against RAS protein was detected by Elisa, and the specific antibody against TLC protein was isolated by combining the specific antibody of TLC protein with the specific antibody of TLC protein. You want to pass through, Iraq ^-strain cut off, RAS GTP type cut off to add a lot of money.

项目成果

R.Ruggieri: "MSI1,a novel negative regulator of the RASーcyclic AMP pathway in Saccharomyces cerevisiae" Proc.Natl.Acad.Sci.USA.86. 8778-8782 (1989)

R. Ruggieri：“MSI1，酿酒酵母 RAS-环状 AMP 途径的新型负调节因子”Proc.Natl.Acad.Sci.USA.86 (1989)。

K.Tanaka: "Saccharomyces cerevisiae genes,IRA1 and IRA2,encode proteins which may be functionally equivalent to mammalian ras GTPase activating protein(GAP)." Cell. (1990)

K.Tanaka：“酿酒酵母基因 IRA1 和 IRA2 编码的蛋白质在功能上可能与哺乳动物 ras GTP 酶激活蛋白 (GAP) 相同。”