酵母RAS2蛋白質の活性調節機構

1.酵母RAS蛋白機能の調節に係わる新しい遺伝子の性格づけ我々は、酵母RAS2の不活化に係わると考えられる遺伝子IRA1を同定した。ira1変異体は、RAS2を不活化できず、活性型RAS2が細胞内に蓄積し、cAMP濃度が上昇するために、熱ショックに対して感受性となる。ira1変異株の熱ショック感受性を相補する遺伝子を分離したところ、二種の新遺伝子が得られた。(1)IRA2:IRA1と高い相同性を示した。ira2破壊株は、ira1破壊株と同様の表現型を示した。遺伝学的解析結果は、IRA1とIRA2は協調して、RAS蛋白の不活化を促進していることを示唆している。(2)MSI1:IRA遺伝子と異なり、MSI1は、コピー数が高い条件で、活性型RAS、RAS2^<valー19>、変異をも抑圧する。トランスデューシンbetaと弱い相同性を示す。msi1破壊株は生育可能なので、必須遺伝子ではない。2.IRA1、IRA2の機能領域の限定IRA1蛋白の一部は、哺乳動物由来のras GTPase Activating Protein(GAP)活性ドメインと相同性を示した(既報)。IRA2遺伝子の各種欠失変異を造成し、強制的に酵母内で発現させて、ira1の相補活性を指標に、IRA2の活性ドメインを限定したところ、その中にGAP相同領域が含まれていた。GAPを酵母内で発現させると、ira1変異を相補した。この結果は、GAPが機能的にもIRA1と似ていることを示している。3.RAS蛋白のGTP型ーGDP型変換反応の調節IRA1、ira2、ira1・ira2および野生型中でRAS2あるいはRAS1を多量発現させ、さらに^<32>Pでラベルする。このような細胞からRAS蛋白を特異抗体を用いて沈降させ、RAS蛋白に結合しているグアニンヌクレオチドをPEIーセルローズTLCで分離した。予想通り、Ira^-株では、RAS・GTP型の割合が顕著に増加していた。

1.酵母RAS蛋白機能の調節に係わる新しい遺伝子の性格づけ我々は、酵母RAS2の不活化に係わると考えられる遺伝子IRA1を同定した。ira1変異体は、RAS2を不活化できず、活性型RAS2が細胞内に蓄積し、cAMP濃度が上昇するために、熱ショックに対して感受性となる。ira1変異株の熱ショック感受性を相補する遺伝子を分離したところ、二種の新遺伝子が得られた。(1)IRA2:IRA1と高い相同性を示した。ira2破壊株は、ira1破壊株と同様の表現型を示した。遺伝学的解析結果は、IRA1とIRA2は協調して、RAS蛋白の不活化を促進していることを示唆している。(2)MSI1:IRA遺伝子と異なり、MSI1は、コピー数が高い条件で、活性型RAS、RAS2^<valー19>、変異をも抑圧する。トランスデューシンbetaと弱い相同性を示す。msi1破壊株は生育可能なので、必須遺伝子ではない。2.IRA1、IRA2の機能領域の限定IRA1蛋白の一部は、哺乳動物由来のras GTPase Activating Protein(GAP)活性ドメインと相同性を示した(既報)。IRA2遺伝子の各種欠失変異を造成し、強制的に酵母内で発現させて、ira1の相補活性を指標に、IRA2の活性ドメインを限定したところ、その中にGAP相同領域が含まれていた。GAPを酵母内で発現させると、ira1変異を相補した。この結果は、GAPが機能的にもIRA1と似ていることを示している。3.RAS蛋白のGTP型ーGDP型変換反応の調節IRA1、ira2、ira1・ira2および野生型中でRAS2あるいはRAS1を多量発現させ、さらに^<32>Pでラベルする。このような細胞からRAS蛋白を特異抗体を用いて沈降させ、RAS蛋白に結合しているグアニンヌクレオチドをPEIーセルローズTLCで分離した。予想通り、Ira^-株では、RAS・GTP型の割合が顕著に増加していた。