ユビキケン・プロテアソーム系による酵母細胞機能制御の解析

普遍存在的蛋白酶体系统对酵母细胞功能调节的分析

基本信息

  • 批准号:
    11144208
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 1.34万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
  • 财政年份:
    1999
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    1999 至 无数据
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

酵母の26Sプロテアソームの機能制御を司る因子を得る目的で、lex-Rpn12をベイトに2-hybridスクリーニングを行った結果RPN3と新奇遺伝子NOB1を得た。本研究ではNOB1の機能解析を行った。NOB1は必須遺伝子であることがわかった。Nob1のホモログを検索したところヒト遺伝子HP-10が最も近縁な遺伝子であることが分かったが、HP-10を酵母で発現させてもnob1欠失を相補できなかった。Nob1に対する抗体をウサギで作製した。この抗体を用いて細胞内のNob1を検出したところ、SDS-PAGEでNob1は塩基配列から予想されたサイズより大きいところに泳動された。Nob1とプロテアソームの関係を調べるために、酵母細胞抽出液をグリセロール密度勾配遠心で分画し、ウヱスターンブロットによって、Nob1と26Sプロテアソーム構成成分との沈降位置を調べた。Nob1はプロテアソームを含む画分に存在し、軽い領域には検出されなかった。さらに、Nob1とプロテアソームの関係を、26Sプロテアソームの構成成分であるRpt1(ATPase)との共沈実験により確認した。Nob1は増殖中の細胞にだけみられ、プロテアソームに結合して機能する蛋白質であることが推定される。
Yeast の 26 s プ ロ テ ア ソ ー ム の function suppression を department る factor を で る purpose, lex - Rpn12 を ベ イ ト に 2 - hybrid ス ク リ ー ニ ン グ を line っ た results RPN3 と novel heritage 伝 son NOB1 を た. In this study, で で NOB1 <s:1> function analysis を lines った. NOB1 伝 must leave 伝 son である とがわ とがわ った った. Nob1 の ホ モ ロ グ を 検 cable し た と こ ろ ヒ ト posthumous son 伝 HP - the most も nearly 10 が try な posthumous son 伝 で あ る こ と が points か っ た が, HP - 10 を yeast で 発 now さ せ て も Nob1 fill owe を phase loss で き な か っ た. Nob1に is used to prepare する antibody をウサギで た. を こ の antibody with い て in cells の Nob1 を 検 out し た と こ ろ, sds-page で Nob1 は salt base with column か ら to think さ れ た サ イ ズ よ り big き い と こ ろ に swimming さ れ た. Nob1 と プ ロ テ ア ソ ー ム の masato is を adjustable べ る た め に cells, yeast extract を グ リ セ ロ ー ル density hook with telecentric で painting し, ウ ヱ ス タ ー ン ブ ロ ッ ト に よ っ て, Nob1 と 26 s プ ロ テ ア ソ ー ム composition と の sink place を べ た. Nob1 は プ ロ テ ア ソ ー ム を む draw points exist に し, 軽 い field に は 検 out さ れ な か っ た. さ ら に, Nob1 と プ ロ テ ア ソ ー ム の masato を, 26 s プ ロ テ ア ソ ー ム の composition で あ る Rpt1 (ATPase) と の total shen be 験 に よ り confirm し た. In the <s:1> proliferation of Nob1, <s:1> cells にだけみられ and プロテアソ ムに ムに ムに bind to <s:1> functional する proteins である である とが とが to infer される.

项目成果

期刊论文数量(6)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Nishizawa, M., Kanoya, Y., and Tohe, A.: "Mouse cyclin dependent kinase (Celk)5 is a functional homologene of a yeast Celk, pho85 kinase"J. Biol. Chem.. 274. 33859-33862 (1999)
Nishizawa, M.、Kanoya, Y. 和 Tohe, A.:“小鼠细胞周期蛋白依赖性激酶 (Celk)5 是酵母 Celk、pho85 激酶的功能同源物”J.
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
Tohe, A. and Oguchi, T.: "Las 21 participates in extracellular phenomenon in sacchanomyces cerevisiae"Gene Genet. sys.. 74. 241-256 (1999)
Tohe, A. 和 Oguchi, T.:“Las 21 参与酿酒酵母的细胞外现象”Gene Genet。
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
Takeuchi, J., Fujimuro, M., Yokosawa, H., Tanaka, K., Tohe, A.: "Rp-9 is required for efficient assembly of the yeast 26S proteasome"Nul. Cell Biol.. 19. 6575-6584 (1999)
Takeuchi, J.、Fujimuro, M.、Yokosawa, H.、Tanaka, K.、Tohe, A.:“酵母 26S 蛋白酶体的有效组装需要 Rp-9”Nul。
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
Tsukamoto, S., Matsunanga, S., Fesetani, N. and Tohe, A.: "Theopederins F-J; Five new antifungal and cyrotoxic metabolites from the marine spurge Theonella swithes"Tetrahedom. 55. 13697-13702 (1999)
Tsukamoto, S.、Matsunanga, S.、Fesetani, N. 和 Tohe, A.:“Theopederins F-J;来自海洋大戟 Theonella swithes 的五种新的抗真菌和细胞毒性代谢物”四面体。
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
Tune, Y., Tanahashi, N., Tanaka, K., Fujimuro, M., Yokosawa, H.: "Nob1, a new essential protein, associates with the 26s proteasome of growing sacchanomyes cerevillal cells"Gene. (in press). (2000)
Tune, Y.、Tanahashi, N.、Tanaka, K.、Fujimuro, M.、Yokosawa, H.:“Nob1,一种新的必需蛋白,与生长的酿酒酵母细胞的 26s 蛋白酶体相关”基因。
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知道了