ユビキチン・プロテアソーム系による酵母細胞機能制御の解析

泛素-蛋白酶体系统对酵母细胞功能调节的分析

• 批准号: 09267209
• 负责人: 東江 昭夫
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09267209/
• 关键词: プロテアソーム; 蛋白質分解; ユビキチン; 出芽酵母; 2-hybrid; 細胞周期

出芽酵母の26Sプロテアソームのサブユニットの一つ、Sun1、を餌に用いた2-hybrid法により分離した遺伝子をLES1と命名した。les1欠失変異体は温度感受性を示した。LES1は線虫にアミノ酸配列上のホモログがあったので、その線虫遺伝子のcDNAをクローニングし酵母で発現させたところles1変異を相補した。野生型酵母から26Sプロテアソームを精製した。抗Les1抗体は26Sプロテアソームの位置に溶出される蛋白質と反応した。さらに、26Sプロテアソーム画分を抗20Sプロテアソーム抗体で免疫沈降すると、Les1が共沈し、抗Les1抗体で免疫沈降すると20Sプロテアソームと既知の26Sプロテアソームサブユニットが共沈したので、Les1は26Sプロテアソームのサブユニットであると結論した。Les1欠失株の細胞抽出液をグリセロール密度勾配遠心で分画すると許容温度で生育したles1株は26Sプロテアソームを微量にしか含まず、さらに、Sun1サブユニットが26Sプロテアソームに取り込まれないことが分かった。この結果から,Les1の作用として、Sun1あるいはさらに未知のサブユニットを26Sプロテアソームに連れていく働きを持つと同時に、26Sプロテアソームの安定維持に働く因子であると考えられる。les1欠失株をG1期後期にアレストし37度にリリースするとこの温度下でもほぼ野生型と同じ速度でSic1を分解した。一方、Clb2の分解は遅かった。この結果はles1変異株が高温でG2アレストを起こすことと一致する。今後、さらにLes1の作用を調べることにより、26Sプロテアソームの構造形成の仕組みやプロテアーゼ活性の調節機構に関する理解を深めることができると期待される。

Budding yeast の 26 s プ ロ テ ア ソ ー ム の サ ブ ユ ニ ッ ト の つ, Sun1, を bait に い た 2 - hybrid method に よ り separation し た posthumous son 伝 を LES1 と named し た. The <s:1> temperature sensitivity を of les1 undervariant indicates that た. LES1 は nematodes に ア ミ ノ acid column deserve の ホ モ ロ グ が あ っ た の で, そ の nematodes heritage 伝 son の cDNA を ク ロ ー ニ ン グ し yeast で 発 now さ せ た と こ ろ LES1 - different fill を phase し た. Wild-type yeast ら ら26Sプロテアソ ムを ムを refined た た. The anti-LES1 antibody に 26Sプロテアソ プロテアソ ム ム ム に site に dissolves される protein と reverse 応 た た. さ ら に, 26 s プ ロ テ ア ソ ー ム draw points を resistance 20 s プ ロ テ ア ソ ー ム antibody immune sink で す る と, Les1 が shen total し, resisting で Les1 antibody immune sink す る と 20 s プ ロ テ ア ソ ー ム と already know の 26 s プ ロ テ ア ソ ー ム サ ブ ユ ニ ッ ト が shen total し た の で, Les1 は 26 s プ ロ テ ア ソ ー ム の サ ブ ユ Youdaoplaceholder0 conclusion: た. Les1 owe の cell loss extract を グ リ セ ロ ー ル density hook with telecentric で points draw す る と allowable temperature で fertility し た Les1 strains は 26 s プ ロ テ ア ソ ー ム を trace に し か containing ま ず, さ ら に, Sun1 サ ブ ユ ニ ッ ト が 26 s プ ロ テ ア ソ ー ム に take り 込 ま れ な い こ と が points か っ た. こ の results か ら, Les1 の role と し て, Sun1 あ る い は さ ら に unknown の サ ブ ユ ニ ッ ト を 26 s プ ロ テ ア ソ ー ム に even れ て い く 働 き を hold つ と に, 26 s プ ロ テ ア ソ ー ム の stability and maintain に 働 く factor で あ る と exam え ら れ る. Late les1 owe lost strains を G1 phase に ア レ ス ト し 37 degrees に リ リ ー ス す る と こ の temperature で も ほ ぼ wild-type と with じ speed で Sic1 を decomposition し た. One side, Clb2 <s:1> decomposition 遅 遅 った. The <s:1> <s:1> result of les1 variant strain が high temperature でG2アレストを and <s:1> す とと とと are consistent する. Role in the future, さ ら に Les1 の を adjustable べ る こ と に よ り, 26 s プ ロ テ ア ソ ー ム の の shi group structure formation み や プ ロ テ ア ー の ゼ activity regulating mechanism に masato す る understand を deep め る こ と が で き る と expect さ れ る.

项目成果

Ito,S., Matsui,Y., Toh・e,A., Harashima,T., Inoue,H: "Isolation and characterization of the Krev-1 gene,a novel member of ras super family in Newospora crasses : involvement in sexual cycle progresion" Mol.Gen.Genet. 255. 429-437 (1997)

Ito, S.、Matsui, Y.、Toh·e, A.、Harashima, T.、Inoue, H：“新孢霉 ras 超家族的新成员 Krev-1 基因的分离和表征：参与255. 429-437 (1997)

Fujimura,M., Tanaka,K., Yokosawa,H., Toh・e,A: "Sonlp is a conponent of the 26S proteasome of the yeart Sacchaiwujyces cerevisioe" FEBS Lett. (in press).

Fujimura,M.、Tanaka,K.、Yokosawa,H.、Toh・e,A：“Sonlp 是酿酒酵母 26S 蛋白酶体的组成部分”FEBS Lett（正在出版）。

Kagami,M., Toh・e,A., Matsui,Y.: "SR09 a multicopy suppressor of the bud growth defect in the saccharomyces cerevisiae rh03 deficient cells,shows strong genetic interactions with tropomyosin genes,suggesting its role in organization of the actin cytoskelet

Kagami,M., Toh・e,A., Matsui,Y.：“SR09 是酿酒酵母 rh03 缺陷细胞中芽生长缺陷的多拷贝抑制因子，显示出与原肌球蛋白基因的强烈遗传相互作用，表明它在组织中的作用肌动蛋白细胞骨架

Uesono,Y., Toh・e,A., Kikuchi,Y.: "Ssd1 of Sacchouoruyces cerevisiae associates with RNA" J.Biol.Chem.272. 16103-16109 (1997)

Ueson，Y.，Toh·e，A.，Kikuchi，Y.：“酿酒酵母的 Ssd1 与 RNA 结合”J.Biol.Chem.272（1997）。

Andoh,T., Kato,T,Jr., Matsui,Y., Toh・e,A.: "Phosphoinosifiderspecific phospholipase C forms a complex with 14-3-3proteins and is involved in expression of resistance in fission yeart" Mol.Gen.Genef.(in press).

Andoh, T.、Kato, T, Jr.、Matsui, Y.、Toh・e, A.：“磷酸肌苷特异性磷脂酶 C 与 14-3-3 蛋白形成复合物，并参与裂变年抗性的表达” Mol .Genef 将军（正在出版）。