蛋白質の細胞内輸送に関与する酵母Usol遺伝子産物の解析

参与细胞内蛋白质转运的酵母 Usol 基因产物分析

• 批准号: 04259207
• 负责人: 依田 幸司
• 金额: $ 1.02万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04259207/
• 关键词: 酵母; 細胞内輸送; Uso1遺伝子

酵母において小胞体-ゴルジ体間の蛋白質輸送に関与するUso1蛋白は、1790アミノ酸よりなる親水性蛋白で、C末端側約1000アミノ酸がcoiled coilのαヘリックスを形成して繊維状の二量体となると予想している。N末端領域及びC末端領域各々約500アミノ酸の配列を認識する抗体を用いUso1蛋白の性質について解析を行った。先の実験では膜への結合を示唆する結果などが得られていたが、抗体の特異性に問題を残していたことが分かったので、厳密な再検討を行った。その結果、大部分のUsol蛋白は細胞質に存在し、蔗糖密度勾配遠心では分子量約250Kの球状蛋白であるカタラーゼとほぼ同じ位置に沈降した。Uso1二量体の予想分子量は412Kであるが、分子量約500Kの繊維状蛋白ミオシンもほぼ同じ位置に沈降することから、沈降速度の小ささは分子の形状に起因すると考えられる。温度感受性uso1-1変異株では、N末端領域に対する抗体では野生型酵母でみられる200Kの蛋白が検出されず、野生型ではみられない100Kの蛋白が抗体に反応して検出された。この100Kの蛋白はC末端領域に対する抗体では検出されなかった。このことはuso1-1変異がナンセンス変異かフレームシフト変異である可能性の示唆するため、この前提で変異があると予想される領域約1000塩基の配列を決定した。その結果、951番目のアミノ酸であるグルタミンのコドンCAGがナンセンス・コドンTAGに変異していることが明らかになった。即ちこの温度感受性変異株ではN末端領域950アミノ酸からなる不完全なUso1蛋白を作っており、約1000アミノ酸に及ぶcoiled coil構造のうち200アミノ酸以降は25℃では機能的に必要でないと考えられる。一方、この温度感受性変異は培地中のカルシウム濃度を増すと抑制され、許容温度においてもカルシウム・キレーターEGTAに対する感受性が高いなどの性質があることから、カルシウムがUso1蛋白の機能に必須であることが示唆された。

Yeast microcyte-to-cell protein transport is related to the formation of Uso1 protein, 1790 amino acid, hydrophilic protein, C-terminal side of about 1000 amino acid, coiled coil and α-protein, which is expected to form two dimensional proteins. The N-terminal domain and the C-terminal domain each have about 500 amino acid sequences. The antibody is used to analyze the properties of the Uso1 protein. The results of the previous study showed that the binding of the antibody was stable and the specificity of the antibody was stable. As a result, most of the Usol proteins are present in the cytoplasm, sucrose density is matched with the globular proteins with molecular weight of about 250K, and they are deposited in the same position. Uso1 dimers are expected to have molecular weights of 412K and 500K, respectively, and to settle at the same position, at a low rate, and at the same time to determine the molecular shape. Temperature sensitive uso1-1 mutants have antibodies against 200K proteins in the N-terminal domain and 100K proteins in wild-type yeast. This 100K protein has been detected in antibodies against the C-terminal domain. The range of possible differences is about 1-1. The range of possible differences is about 1000. The results are as follows: 951. That is, the temperature sensitive mutant has a N-terminal domain of 950 ° C and an incomplete Uso1 protein, and the coiled coil structure has a structure of about 1000 ° C and 200 ° C, which is necessary for reducing the temperature of 25 ° C. The temperature sensitivity of Uso1 protein is different from that of Uso1 protein in culture. The concentration of Uso1 protein in culture is increased, the temperature is inhibited, and the sensitivity of Uso1 protein to EGTA is increased.