蛋白質の細胞内輸送に関与する酵母USO1遺伝子産物の解析

参与胞内蛋白质转运的酵母USO1基因产物分析

• 批准号: 05252206
• 负责人: 依田 幸司
• 金额: $ 1.02万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05252206/
• 关键词: 酵母; 蛋白質輸送; USO1遺伝子

酵母において小胞体-ゴルジ体間の蛋白質輸送に関与するUso1蛋白は、1790アミノ酸よりなる親水性蛋白で、C末端側1070アミノ酸がcoiled coilのαヘリックスを形成して繊維状の二量体となって機能している。温度感受性uso1-1変異株では、951番目のコドンがナンセンス・コドンTAGに変異していることを昨年度明らかにしたが、温度感受性形質が培地中のカルシウム濃度を増すと抑制され、許容温度においてもカルシウムキレーターEGTAに対する感受性が高いなどの性質があることから、467-479残基目に認められるカルシウム結合共通配列がUso1蛋白の機能に必須である可能性が示唆されていた。本年度はこの点を調べるため、部分精製したUso1蛋白質及びこの領域を含む合成ペプチドと^<45>Caの結合を検討したが、いずれも結合は認められなかった。そこで、共通配列を破壊した変異遺伝子を4種類プラスミド上で作製し、uso1-1変異株及びLEU2マーカーによる遺伝子破壊株に導入したところ、いずれも25℃から37℃まで生育可能であった。以上の結果からカルシウム結合共通配列と考えていた領域は実際には機能をもっていないことが明らかとなった。ナンセンス変異による短いUso1蛋白質が温度感受性を示すことについて調ベるため、プラスミド上でC末端側からUSO1遺伝子を欠失させてゆき、uso1遺伝子欠失株に導入して調べたところ、N末端から1084アミノ酸までのものは33.5℃までは生育するが37℃では生育せず、723アミノ酸まで及びそれ以下のものはまったく生育が認められなかった。このことから、野生型Uso1蛋白質に1070アミノ酸あるcoiled coil領域は330アミノ酸以上ないと蛋白質が37℃で機能できず、200アミノ酸まであれば低温で機能でき、この領域をもたないものは機能を失うことが分かった。

Yeast に お い て small cell body - ゴ ル の protein transport between ジ に masato and す る Uso1 protein は, 1790 ア ミ ノ acid よ り な る で, hydrophilic protein C terminal side 1070 ア ミ ノ acid が coiled coil の alpha ヘ リ ッ ク ス を form し て 繊 dimensional shape の two quantity body と な っ て function し て い る. Temperature sensitivity uso1-1 - different strains で は, 951's mesh の コ ド ン が ナ ン セ ン ス · コ ド ン TAG に - different し て い る こ と を yesterday annual Ming ら か に し た が, temperature sensibility character が in petty の カ ル シ ウ ム concentration を raised す と inhibit さ れ, allowable temperature に お い て も カ ル シ ウ ム キ レ ー タ ー EGTA に す seaborne る susceptibility が high い な ど の nature が あ る こ と か ら, residue, 467-479 mesh に め ら れ る カ ル シ ウ ム combination with common column が の Uso1 protein function に must で あ が る possibility in stopping さ れ て い た. This year は こ の point を adjustable べ る た め, part refined し た Uso1 protein and び こ の field を む synthesis ペ プ チ ド と ^ < > 45 Ca の combining を beg し 検 た が, い ず れ も combining は recognize め ら れ な か っ た. そ こ で, common column を broken 壊 し た - different heritage 伝 son を 4 kinds プ ラ ス ミ ド で as し, uso1-1 - on different strains and び LEU2 マ ー カ ー に よ る heritage 伝 son broken 壊 strains に import し た と こ ろ, い ず れ も 25 ℃ か ら 37 ℃ ま で fertility may で あ っ た. の above results か ら カ ル シ ウ ム combination with common column と exam え て い は た field be interstate に は function を も っ て い な い こ と が Ming ら か と な っ た. ナ ン セ ン ス - different に よ る short い Uso1 protein が temperature sensitivity を shown す こ と に つ い て adjustable ベ る た め, プ ラ ス ミ ド で C terminal on lateral か ら Uso1 heritage 伝 を owe son lost さ せ て ゆ き, Uso1 heritage 伝 lost son owe strains に import し て adjustable べ た と こ ろ, N terminal か ら 1084 ア ミ ノ acid ま で の も の は 33.5 ℃ ま で は fertility す る が 37 ℃ で は fertility せ ず, 723 ア ミ ノ acid ま で and び そ れ following の も の は ま っ た く fertility が recognize め ら れ な か っ た. こ の こ と か ら, wild type Uso1 protein に 1070 ア ミ ノ acid あ る coiled coil field は 330 ア ミ ノ acid above な い と protein が 37 ℃ で function で き ず, 200 ア ミ ノ acid ま で あ れ ば function of low-temperature で で き, こ の field を も た な い も の は function を lost う こ と が points か っ た.