枯草菌TmrB遺伝子産物によるツニカマイシン耐性機構

枯草芽孢杆菌TmrB基因产物对衣霉素耐药机制

• 批准号: 04660107
• 负责人: 依田 幸司
• 金额: $ 0.96万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04660107/
• 关键词: 枯草菌; ツニカマイシン; TmrB遺伝子

枯草菌のTmrB遺伝子産物は、197アミノ酸よりなる親水性蛋白で、高生産されることにより枯草菌に抗生物質ツニカマイシンに対する耐性を与える。大腸菌で生産されたTmrB蛋白はC末端に存在する両親媒性αヘリックスにより細胞質膜に結合し、またN末端領域にあるATP結合配列でATPを結合することが示されているが、枯草菌における本蛋白の挙動は明らかでなかった。本研究では抗TmrB蛋白抗体を用いて枯草菌における本蛋白の挙動を調べた。遺伝子の多コピー化によって枯草菌においてもTmrB蛋白が増加することは確認されたが、C末端の両親媒性αヘリックスを破壊した変異株でも大腸菌におけるとは異なり膜への結合性に変化がなかった。また枯草菌においては大腸菌の場合と異なり温和な界面活性剤処理では膜から遊離せず、尿素や蛋白変性作用を伴う界面活性剤を用いることで初めて可溶化された。一方、染色体上の遺伝子増幅でツニカマイシン耐性になった株に変異tmrB遺伝子を多コピーで導入するとツニカマイシンに対する耐性が低下するという優性欠損現象がみられた。以上のことはTmrB蛋白が枯草菌においては単独で機能しているのではなく他の細胞成分と協同で働いていることを意味していると考えられる。そこでTmrB蛋白と協同して機能している蛋白を明らかにするため、この欠損変異を検索した。即ちTmrB蛋白が高生産されているにも拘らずツニカマイシンに対して耐性にならない変異株を多数取得し、これらの中からツニカマイシンの標的酵素であるN-アセチルグルコサミン転移酵素の活性が低下したもの、他の薬剤に対しても高感受性となる薬剤の透過性に起因するものを除外した。こうして選択された候補の変異株について、再びツニカマイシン耐性を回復するDNA断片のクローン化による解析を進めている。

The TmrB gene product of Bacillus subtilis is resistant to 197 kinds of acid and hydrophilic protein, high production and resistance to antibiotics. E. coli produces TmrB protein, which is present in the C-terminal domain, and which binds to the plasma membrane, ATP binding to the N-terminal domain, and ATP binding to the N-terminal domain. In this study, anti-TmrB antibodies were used to modulate the activity of this protein in Bacillus subtilis. The expression of TmrB protein in E. coli was determined by PCR. Subtle bacteria, Escherichia coli and other bacteria in different situations, mild surfactant treatment, membrane dissociation, urea protein interaction, and surfactant application. The gene on one side and chromosome is increased in amplitude, and the gene on the other side is decreased in tolerance. The above mentioned TmrB protein can be used as an independent component of Bacillus subtilis. TmrB protein has a synergistic function. That is, the high production of TmrB protein in the middle of the production process, the high sensitivity of the target enzyme, the high sensitivity of the target enzyme, the low activity of the target enzyme, the high sensitivity of the target enzyme, the low activity of the target enzyme, the high sensitivity of the target enzyme, the high sensitivity of the target enzyme, the low activity of the target enzyme, the high sensitivity of the target enzyme, the low activity of the target enzyme, the high sensitivity of the target enzyme, the high sensitivity of the target enzyme, the high permeability of the target enzyme, the high sensitivity of the target enzyme, the target enzyme, the high sensitivity of the target enzyme, the high sensitivity of the target enzyme, the target enzyme, the high sensitivity of the target enzyme, the target enzyme, the high The analysis of DNA fragments in the selection of candidate plants is carried out in the following ways: