小胞輸送に必要な酵母ゴルジ体構成要素の分子解析

囊泡运输所需的酵母高尔基体成分的分子分析

• 批准号: 02F00177
• 负责人: 依田 幸司
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02F00177/
• 关键词: 酵母; ゴルジ体; 必須遺伝子; 小胞輸送; 膜タンパク質; GAS1遺伝子

ゲノム全塩基配列が1996年に公表された酵母Saccharomyces cerevisiaeの遺伝子の中には、機能未知のものがまだ多数存在している。遺伝子破壊実験から、生育に必須であることが判明しており、かつ膜タンパク質であると予想されるものについて、タグ標識タンパク質を発現させてその局在を調べた。YBR070cの遺伝子産物は、237アミノ酸からなるタンパク質だが、3つの膜貫通領域をもつと予想された。タグ標識したタンパク質は、破壊株で発現するとその致死性を回避することができることから、タグを付加しても正常な機能を失っていないことを確認した。細胞を破砕してそれを遠心分画すると、タグ標識タンパク質は沈殿画分に回収され、その電気泳動試料を煮沸するとタグ標識タンパク質がゲル内に泳動されないという、膜タンパク質固有の特徴を示した。免疫蛍光染色による観察では細胞内に斑点状の像が認められた。このことは、Ybr070cタンパク質がゴルジ体に存在することを強く示唆している。データベース上には、Ybr070cタンパク質がYg1047wというやはり生育に必須で機能未知のタンパク質と結合することが記載されている。Yg1047wは、Atp7,Clc1,Mrpl13,Tub1,Tub3,Ydj1,Gpi17,Tlg1,Las17,Ygr117cなどと結合し、これらの中には小胞輸送の後期と関わりの深いものがあることから、Ybr070cは、ゴルジ体において、小胞輸送の未知の必須な機能をはたしていることが強く示唆される。その機能を明らかにするために、本遺伝子の変異株の取得を試みた。PCRでランダムな塩基置換を遺伝子内に導入させ、プラスミドで遺伝子破壊株中の野生型遺伝子と置換した。約4000の形質転換体のなかから、30℃では生育するが37℃でコロニーを作れない温度感受性株を2つ取得することに成功した。

In 1996, in the public table, most of the samples of yeast Saccharomyces cerevisiae were found in the public table, and most of them were not aware of their capacity. If you don't want to have a baby, you must have a baby, and you must have a baby. If you want to, you must know if you want to, and if you don't want to, you must know that you are in a bad situation. YBR070c, 237, 237, 237, 237, 237, 237, 237, 237, 237, 237, 237, 237, 237, 237, 237, 237, 237, 237, 237, 237, 237, 237, 237, 237, 237, 237, 237, 237, 237, 237, 237, 237, 237, 237, and 3. No sign, no problem. There is a lot of information about how to separate the drawing, the swimming, the swimming and the swimming. Immuno-light staining was used to observe the intracellular speckles. There is a strong indication of instigation in the body of the body in which there is a strong indication of instigation and instigation in the body of the body in which there is a strong indication of instigation and instigation. It is necessary for the machine to have a baby that is not known to the computer and to record the number of children who are born in the Yg1047w health care system. The combination of Yg1047w and Atp7,Clc1,Mrpl13,Tub1,Tub3,Ydj1,Gpi17,Tlg1,Las17,Ygr117c devices, and the late-stage delivery of small cells must be used in order to make sure that the information is not known, and it is necessary to make sure that the message is not known. The machine will be able to verify that the test results have been obtained. The wild type in the PCR plant was isolated from the wild type plant. About 4000 of the plants were born at 30 ℃ and 37 ℃ at 37 ℃. The temperature-sensitive strain 2 was successful.