小胞輸送に必要な酵母ゴルジ体構成要素の分子解析

囊泡运输所需的酵母高尔基体成分的分子分析

• 批准号: 02F02177
• 负责人: 依田 幸司
• 金额: $ 0.26万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02F02177/
• 关键词: 酵母; ゴルジ体; 必須遺伝子; 小胞輸送; 膜タンパク質

酵母のゲノム情報から、遺伝子破壊により生育できなくなる必須な遺伝子で、これまで解析されていない膜タンパク質をコードするものをデータベース検索で得た。これらの遺伝子が、片方で破壊されている二倍体株に、当該遺伝子をプラスミドで導入して胞子形成させ、四分子解析により、確かにデータベースで予想される遺伝子が実在し、生育に必須であることを確認していった。更にそのなかで、産物にGFP, myc, HAなどのタグをつけて導入しても生育回復活性を失わない遺伝子を選び出した。これによって蛍光顕微鏡で細胞内の局在性を調べることが可能になり、ゴルジ体および近傍の小胞輸送系オルガネラに局在しているものを複数見出した。次いで、YBR070cおよびYFR042wについて、その生育に必須な機能をより詳細に解析するため、in vitroのPCR mutagensisを行い、これらの遺伝子の温度感受性変異株を複数種類造成することに成功した。これらの温度感受性株は、37℃にすると直ちに生育を停止したが、変異タンパク質の局在は野生型と変わらなかった。この非許容温度において、カルボキシペプチダーゼYの細胞内輸送にはいずれの変異でも影響は認められなかったが、YBR070c変異株でインベルターゼの輸送の阻害と、小胞体内腔タンパク質BiP(Kar2)の培地への漏出、即ち小胞体局在機能への影響が認められた。これらの従来未解析だったゲノム情報について、貴重な変異株及び遺伝子資源を得て、新たな細胞の現象を発見したことは、学術上重要な成果であり、これからの更なる研究の発展も期待される。

Yeast must be able to produce information, genes, and genes that are necessary for reproduction, analysis, and production. In the case of a diploid strain, when the gene is introduced into the diploid strain, the tetraploid analysis is performed to determine whether the gene is present or not. In addition, the products GFP, myc, HA are introduced and the fertility recovery activity is lost. This is the first time that a cell's intrinsic properties have been modulated by light microscopy. YBR070c and YFR042w are used to analyze the necessary functions of fertility in detail. They are caused by temperature sensitive mutants of the progeny. The temperature sensitive plant is at 37℃, and its fertility is at 37℃. The effects of different temperatures on the intracellular transport of the cells are recognized. YBR070c has different effects on the intracellular transport of the cells. The effects of different temperatures on the intracellular transport of the cells are recognized. The effects of different temperatures on the intracellular transport of the cells are recognized. The development of new cell phenomena and valuable plant and genetic resources is expected.