酵母分秘蛋白質の小胞体膜識別・透過機構

酵母分泌蛋白的内质网膜鉴定及渗透机制

• 批准号: 04259224
• 负责人: 天谷 吉宏
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Yokohama City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04259224/
• 关键词: シグナル認識粒子; GTP結合蛋白質; 分秘蛋白質; 小胞体膜; 蛋白質の膜透過; SRH1遺伝子

哺乳類のシグナル認識粒子(SRP)54Kサブユニットは分泌蛋白質の小胞体膜識別、透過に関与するGTP結合蛋白質である。申請者らは、酵母のSRP54Kサブユニット相同遺伝子コードするSRH1遺伝子を単離し、酵母においてもSRPに依存した分泌蛋白質の小胞体膜識別、透過が存在することを示してきた。この結果をふまえ、本研究ではGTPがSRH1の機能発現に及ぼす役割の解析、GTPase活性調節因子の検索と相互作用機構の解析、SRH1遺伝子産物とシグナルペプチドやSRP受容体との相互作用機構解析、もうひとつの小胞体膜識別系である70K熱ショック蛋白質に依存した系との関連を解明していくことをめざしている。酵母の実験系の特長である遺伝学的手法も含めて上記の問題点を解明していくために、GTP結合部位に変異を持つSRH1遺伝子の単離と、変異遺伝子産物の解析を行った。この結果、2種類の優性の低温感受性変異株を単離し、その変異部位の同定を行った。変異株の生化学的解析から、変異遺伝子産物は野生型に較べやや不安定ながら、酵母SRPにアセンブルされていることから、本変異株による表現型は主にGTPase活性の変化、またはそれにともなう本遺伝子産物のコンフォメーション転換の違いに起因するものと推定されることを示した。さらに分泌蛋白質の小胞体膜透過のin vivoにおける速度論的解析から、SRH1遺伝子産物のGTP結合部位の変異によるGTPase活性の変化はシグナルペプチドとSRH1遺伝子産物の相互作用に影響を与えていることを示唆する知見を得た(投稿準備中)。70K熱ショック蛋白質の変異細胞内での大量発現実験から、SRPに依存した小胞体膜識別系と熱ショック蛋白質に依存した小胞体膜識別系の関連に対する予備的知見を得た。

Mammalian recognition particles (SRP)54K protein recognition, permeability and GTP-binding protein secretion of small cell membrane. The applicant is responsible for the identification and transmission of SRH1 protein, which is dependent on SRP54 protein. These results are helpful for understanding the function and function of SRH1, the interaction mechanism of GTase activity regulators, the interaction mechanism of SRH1 receptor products and SRP receptors, and the relationship between SRH1 membrane recognition system and protein dependence system at 70K. The characteristics of yeast system include the analysis of the problem points, GTP binding sites and SRH1 gene products. The results showed that two kinds of low temperature sensitive plants were isolated and different parts were stable. Biochemical analysis of the mutant showed that the mutant product was unstable compared to the wild type, and the yeast SRP was not stable. The phenotype of the mutant showed a change in GTase activity, and the mutant product was stable compared to the wild type. In addition, we have obtained insights into the rate-theoretic analysis of the passage of secretory proteins through microsomal membranes in vivo, and the influence of changes in GTPase activity due to changes in the GTP-binding site of SRH1 gene products on the interaction between Sisteral proteins and SRH1 gene products (preparation for submission). 70K heat transfer protein is found in a large number of different cells, SRP is dependent on small cell membrane recognition system and heat transfer protein is dependent on small cell membrane recognition system.

项目成果

S. Kawamoto, Y. Amaya, S. Hattori, Y. Miyagi, H. Ohnishi and K. Okuda: "Structural analysis of an extremely long 5'-noncoding region of rat brain argininosuccinate lyase mRNA." Biochim. Biophys. Acta. (1993)

S. Kawamoto、Y. Amaya、S. Hattori、Y. Miyagi、H. Ohnishi 和 K. Okuda：“大鼠脑精氨琥珀酸裂解酶 mRNA 极长 5-非编码区域的结构分析。”

天谷 吉宏: "分泌蛋白質の小胞体膜透過" 生体の科学. 44. (1993)

Yoshihiro Amaya：“分泌蛋白通过内质网膜的渗透”，《生物科学》44。（1993）

Y. Amaya and A. Nakano: "Isolation of GTP-binding domain mutants of SRH1 using ¨doped¨ mutagenesis." J. Cell. Biochem.17C. 11-11 (1993)

Y. Amaya 和 A. Nakano：“使用“掺杂”诱变分离 SRH1 的 GTP 结合域突变体。J. Biochem.11-11 (1993)。