神経回路形成におけるGTP結合蛋白質Rac1のin vivoでの機能解析

GTP结合蛋白Rac1在神经回路形成中的体内功能分析

• 批准号: 15029238
• 负责人: 饗場 篤
• 金额: $ 4.48万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15029238/
• 关键词: rac; loxP; コンディショナルノックアウトマウス; プルキンエ細胞; シナプス形成; Cre; セマフォリン3F; トランスジェニックマウス; rac1; rac3; ジーンターゲッティング; HeRed; 神経回路形成

(1)rac遺伝子座にloxPを導入したマウスの作製rac1遺伝子の開始コドンを含むエキソンをloxPで挟んだアリルを導入したrac1(flox/flox)マウス、rac3遺伝子の開始コドンを含むエキソンの5'非翻訳領域にloxPを導入し、rac3遺伝子の最終エキソンのpolyA付加シグナルの3領域にloxP-HcRedを導入したrac3(+/flox-HcRed)マウスを作製した。(2)コンディショナルRac1ノックアウトマウスの解析小脳プルキンエ細胞特異的にCreを発現するL7(+/cre)マウスを用い、rac1(flox/flox)L7(+/cre)マウスを作製した。rac1(flox/flox)L7(+/cre)マウスは小脳失調を示さず、ヘマトキシリンーエオシン染色での観察では大きな構造上の異常は見られなかった。カルビンジン染色によりプルキンエ細胞の樹上突起の形状を観察した結果、樹状突起の形態に異常が観察された。また、電子顕微鏡観察により、Rac1欠損プルキンエ細胞上での平行線維シナプスの密度を測定したところ、Rac1欠損細胞では明らかにシナプス密度が野生型より低く、Rac1がシナプスの形成もしくは維持に関与していることが示唆された。(3)領域特異的Cre発現マウスの作製神経細胞特異的Racコンディショナルノックアウト作製のための領域特異的Cre発現マウスとして、大脳皮質、海馬等でCreを発現するEmx1-creノックインマウスを作製し、小脳顆粒細胞でCreを発現するNR2C(GluRe3)-cre Tg(2系統のファウンダーを交配中)を作製した。(4)セマフォリン3F(sema3F)ノックアウトマウスの作製Sema3Fの神経回路形成及び神経機能への関与を個体レベルで調べるため、マウスSema3F遺伝子座にlacZ遺伝子をノックインしたマウスを作製した。

(1) the rac heritage 伝 stroma に loxP を import し た マ ウ ス の cropping rac1 heritage 伝 の started コ ド ン を containing む エ キ ソ ン を loxP で carry ん だ ア リ ル を import し た rac1 flox/flox マ ウ ス, rac3 heritage 伝 の started コ ド ン を containing む エ キ ソ ン の 5 'non turn 訳 field に loxP を import し, Rac3 伝 の son was finally エ キ ソ ン の polyA plus シ グ ナ ル の 3 areas に loxP - HcRed を import し た rac3 (+ / flox HcRed マ ウ ス を cropping し た. (2) コ ン デ ィ シ ョ ナ ル Rac1 ノ ッ ク ア ウ ト マ ウ ス の parsing small 脳 プ ル キ ン エ cell specific に Cre を 発 now す る about (+ / Cre) マ ウ ス を い, Rac1 (flox/flox) about the (+ / Cre) マ ウ ス を cropping し た. Rac1 (flox/flox) about the (+ / cre) マ ウ ス は small 脳 disorder を shown さ ず, ヘ マ ト キ シ リ ン ー エ オ シ ン dyeing で の 観 examine で は big き な structure on abnormal の は see ら れ な か っ た. カ ル ビ ン ジ ン dyeing に よ り プ ル キ ン エ の tree processes の shape を 観 examine し た abnormal results, dendritic protrusions の form に が 観 examine さ れ た. ま た, electronic 顕 micromirror 観 examine に よ り, Rac1 owe damage プ ル キ ン エ cells で の parallel d シ ナ プ ス の density measurement し を た と こ ろ, Rac1 owe damage cells で は Ming ら か に シ ナ プ ス density が wild-type よ り low く, Rac1 が シ ナ プ ス の form も し く は maintain に masato and し て い る こ と が in stopping さ れ た. (3) domain specific Cre 発 now マ ウ ス の of god 経 cell specific Rac コ ン デ ィ シ ョ ナ ル ノ ッ ク ア ウ ト cropping の た め の domain specific Cre 発 now マ ウ ス と し て, big 脳 cortex, hippocampus and other で Cre を 発 now す る Emx1 - Cre ノ ッ ク イ ン マ ウ ス make を し, little 脳 granulosa cells で Cre を 発 now す る N R2C(GluRe3)-cre Tg(in the process of mating with the 2-system <s:1> ファウ ダ を を を を を)を preparation た. (4) セ マ フ ォ リ ン 3 f (sema3F) ノ ッ ク ア ウ ト マ ウ ス の cropping sema3F の god 経 loop formation and び 経 function へ の masato and individual を レ ベ ル で adjustable べ る た め, マ ウ ス sema3F heritage 伝 stroma に lacZ posthumous son 伝 を ノ ッ ク イ ン し た マ ウ ス を cropping し た.

项目成果

Chida et al.: "Disruption of protein kinase Cη results in impairment of wound healing and enhancement of tumor formation in mouse skin carcinogenesis"Cancer Res.. 63. 2404-2408 (2003)

Chida 等人：“蛋白激酶 Cn 的破坏导致小鼠皮肤癌变过程中伤口愈合受损和肿瘤形成增强”Cancer Res.. 63. 2404-2408 (2003)

Kuwajima et al.: "Subcellular and subsynaptic localization of group t metabotropic glutamate receptors in the monkey subthalamic nucleus."J.Comp.Neurol.. (印刷中). (2004)

Kuwajima 等人：“猴子底丘脑核中 t 族代谢型谷氨酸受体的亚细胞和突触下定位。”J.Comp.Neurol..（出版中）。

Subcellular and subsynaptic localization of group I metabotropic glutamate receptors in the monkey subthalamic nucleus

• DOI: 10.1002/cne.20158
• 发表时间: 2004-07-05
• 期刊: JOURNAL OF COMPARATIVE NEUROLOGY
• 影响因子: 2.5
• 作者: Kuwajima, M;Hall, RA;Smith, Y
• 通讯作者: Smith, Y

A gene-targeted mouse model for chorea-acanthocytosis

• DOI: 10.1111/j.1471-4159.2004.02924.x
• 发表时间: 2005-02-01
• 期刊: JOURNAL OF NEUROCHEMISTRY
• 影响因子: 4.7
• 作者: Tomemori, Y;Ichiba, M;Sano, A
• 通讯作者: Sano, A