がん遺伝子としてのオルニチン脱炭酸酵素遺伝子

鸟氨酸脱羧酶基因作为癌基因

• 批准号: 08670138
• 负责人: 久保田 俊一郎
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08670138/
• 关键词: オルニチン脱炭酸酵素; 癌原遺伝子; MAP kinase; 浸潤; 転移

「ODCが癌原遺伝子で癌細胞浸潤さらに癌転移において大きな役割を果たす」との作業仮説をたてて以下の実験を行い、仮説を支持する成果を得た。ラットODCのcDNAを発現ベクター(pCRL-SRα296)に組み込み、マウス線維芽細胞(10T1/2)にNeo遺伝子と共にトランスフェクトした。G418含有培養液で2週間培養後、G418抵抗性のトランスフェクタントを選択した。個々のトランスフェクタントのODC活性測定とノーザンブロット解析により、ODC過剰発現トランスフェクタオントを4株(ODC-1-4)確立した。同時にcontrolのトランスフェクタント(Neo-1-3)も確立した。ODC-1-4は、いずれもフェーカス形成能及び軟寒天中での増殖能を有し、一方、Neo-1-3および10T1/2細胞は、フォーカス形成能及び軟寒天中での増殖能は全くなく、ODC過剰発現トランスフェクタントのみ癌化したことが証明された。さらに、in vitroでBoyden chamberを用いて、ODC-1-4の細胞浸潤能を測定したところ、Neo-1-3および10T1/2細胞に比して、約3倍浸潤能が亢進していることが判明した。これらの結果は上記の仮説を支持する。さらに、ODC過剰発現が、癌化および浸潤能亢進を引き起こす機能を解明するため、以下の実験を行い、興味ある結果を得た。チロシンリン酸化が癌化と密接な関連のあることが知られている。そこで、ODC-1-4のチロシンリン酸化の程度を抗Tyr抗体を用いて測定したところ、分子量4万前後の蛋白質のチロシンリン酸化が亢進していることが判明した。抗MAP kinase抗体を用いて、この蛋白質を同定したところ、MAP kinase(42kDa,44kDa)であることが明らかとなった。この結果は、ODC情報伝達系の下流でMAP kinaseが働いていることを初めて明らかにした。

The following results were obtained from the study of "ODC as a source of cancer, cancer cell invasion, cancer metastasis, and tumor metastasis." The cDNA of ODC was found in pCRL-SRα296, which was composed of Neo gene and Neo gene in cell (10T1/2). G418 was cultured in medium for 2 weeks, and the resistance of G418 was evaluated. Four strains (ODC-1-4) were established for ODC activity assay and ODC overgrowth assay. At the same time, the control mode is selected (Neo-1-3). ODC-1-4 has been proved to be able to form and proliferate cells in soft and cold weather. Neo-1-3 and 10T1/2 cells have been proved to be able to form and proliferate cells in soft and cold weather. In vitro, Boyden chamber was used to determine the cell infiltration ability of ODC-1-4 cells, Neo-1-3 cells and 10T1/2 cells, and about 3 times the infiltration ability was increased. The results of this review are supported by the above review. In addition, ODC has been found, cancer and infiltration can be induced, and the following functions can be explained. The relationship between cancer and cancer is unknown. The degree of acidification of ODC-1-4 was determined by anti-Tyr antibody. The degree of acidification of protein with molecular weight around 40,000 was determined. Anti-MAP kinase antibodies were used to identify MAP kinase(42kDa,44kDa). As a result, ODC information transmission system downstream MAP kinase is transmitted to the public.

项目成果

久保田俊一郎(分担): "PCR法最前線" 共立出版, 338 (1996)

久保田俊一郎（撰稿人）：《PCR 方法的前沿》Kyoritsu Shuppan，338（1996）

久保田俊一郎(分担): "消化器病-分子メカニズムから病態・診断・治療まで" 羊土社, 214 (1996)

Shunichiro Kubota（撰稿人）：“胃肠道疾病 - 从分子机制到病理学、诊断和治疗”Yodosha，214（1996）

S.Kubota,H.Kiyosawa Y.Nomura,T.Yamada,Y.Seyama: "Ornithine Decarboxylase Overexpression in Mouse 10T1/2 Fibroblasts:Cellular Transformation and Invasion" J.Natl.Cancer Inst.(印刷中). (1997)

S. Kubota、H. Kiyosawa Y. Nomura、T. Yamada、Y. Seyama：“小鼠 10T1/2 成纤维细胞中鸟氨酸脱羧酶过度表达：细胞转化和侵袭”J. Natl Cancer Inst。

S.Kubota,H.Ito Y.Ishibashi,Y.Seyama: "Anti-α3 integrin antibody induces the activated form of matrix metalloprotease-2 with concomitant stimulation of invasion" Int.J.Cancer. 70. 106-111 (1997)

S.Kubota、H.Ito Y.Ishibashi、Y.Seyama：“抗 α3 整联蛋白抗体诱导基质金属蛋白酶 2 的活化形式并伴随刺激侵袭”Int.J.Cancer 70. 106-111 (1997)。