Gunnラットへの遺伝子導入による先天性黄疸の解明と治療の基礎研究

基因导入Gunn大鼠阐明和治疗先天性黄疸的基础研究

• 批准号: 05253212
• 负责人: 金田 安史
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05253212/
• 关键词: 先天性黄疸; 遺伝子治療; HVJ-リポソーム

GunnラットはUDP-glucuronosyl transferaseの欠損によりビリルビンの抱合不全をおこし、先天性の黄疸を呈するヒトのCriegler-Najjar症候群のモデル動物である。私達は、ビリルビンを抱合するUDP-glucuronosyl transferaseラットcDNAをクローニングするとともに、生体組織への効率のよい遺伝子導入法HVJ-liposomeを開発したので、これらを用いて成育Gunnラットへの肝臓へ遺伝子導入を行ない、黄疸の遺伝子レベルでの治療の可能性について検討した。HVJ-liposome法によりUDP-glucuronosyl transferaseのcDNA約40μgをGunnラットの肝臓に直接導入し、3日後に酵素活性を測定すると正常ラットの約10%の酵素が発現された。遺伝子導入後、3日毎にラット血中のビリルビン値を測定すると、導入3〜4日後から減少し、正常に比べ約30%の減少を示し、これが1回の投与で約30日持続した。30日後に2度目の投与を行なうと、さらに約1ケ月約30%減少を認めた。一方、Gunnラットは新生仔期に小脳へのビリルビン沈着により小脳障害が併発する。そこで生後4日のGunnラットの肝臓に、HVJ-liposomeによりUDP-glucuronosyl transferase cDNAを導入すると生後25日目で約30%の血中ビリルビン値の減少を認めると共に、64%の小脳重量の回復を認めた。しかし、正常ラットの小脳重量と比較するとまだ十分な回復とはいえない。UDP-glucuronosyl transferaseは1つの遺伝子からスプライシングの相違により種々のtranscriptがつくられることが知られており、私達は現在用いているcDNAより、強力なビリルビン抱合能をもつと思われる新たなcDNAをクローニングした。このcDNAの遺伝子導入により、Gunnラットの黄疸の治療は、さらに改善されると期待される。

Gunn's disease is caused by deficiency of UDP-glucuronosyl transferase, incomplete cohesion of the liver, congenital jaundice, and Criegler-Najjar syndrome in animals. In addition to the development of the UDP-glucuronosyl transferase cDNA library in conjunction with the real-time website, the HVJ-liposome, an efficient gene introduction method into biological tissues, has been developed. Its use in the introduction of liver gene into the liver of adult Gunn Rai and the possibility of treating jaundice have been discussed. About 40μg of UDP-glucuronosyl transferase cDNA was directly introduced into the liver by HVJ-liposome method, and about 10% of the enzyme activity was detected after 3 days. After the introduction of the virus, 3 days after the introduction of the virus, the serum level of the virus decreased by about 30% compared with the normal level, and the virus continued for about 30 days. After 30 days, the investment rate decreased by about 30%. On the one hand, Gunn's wife is a small child and a small child is a small child. About 30% of the serum lipid levels were reduced and 64% of the serum lipid levels were recovered after the introduction of UDP-glucuronosyl transferase cDNA on day 4 after birth. The weight of a small piece of paper is very small. UDP-glucuronosyl transferase is used to detect cDNA fragments, and to detect new cDNA fragments. This cDNA gene is introduced into the treatment of jaundice, which is expected to improve.

项目成果

A.Uchiyama,et al.: "Transfection of interleukin-2 gene into human melanoma cells augments cellular immune response" Cancer Research. 53. 949-952 (1993)

A.Uchiyama 等人：“将白细胞介素 2 基因转染到人类黑色素瘤细胞中可增强细胞免疫反应”癌症研究。

Y.Kaneda,et al.: "The analysis of 40 kDa nuclear protein,p40,in interphase cells and mitotic cells" J.Cell Science. 106. 741-748 (1993)

Y.Kaneda 等人：“间期细胞和有丝分裂细胞中 40 kDa 核蛋白 p40 的分析”J.Cell Science。

R.Morishita,et al.: "Novel and effective gene transfer technique for study of vascular renin angiotensin system" J.Clinical Investigation. 91. 2580-2585 (1993)

R.Morishita 等人：“用于研究血管肾素血管紧张素系统的新颖有效的基因转移技术”J.Clinical Investigation。

Y.Kaneda: "A laboratory handbook" Academic Press,Inc.Orlando Florida(in press),

Y.Kaneda：《实验室手册》Academic Press,Inc.Orlando Florida（印刷中），

N.Tomita,et al.: "Hypertensive rats produced by in vivo introduction of the human renin gene" Circuration Research. 73. 898-905 (1993)

N.Tomita 等人：“体内导入人肾素基因产生的高血压大鼠”循环研究。