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導入遺伝子の長期発現増強法を用いた転移性癌の遺伝子治療法の開発

利用转基因的长期表达增强开发转移性癌症的基因疗法

基本信息

批准号：
13218069
负责人：
金田安史
金额：
$ 25.86万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

癌抗原関連遺伝子が同定されていない癌に対し、PEGや電気穿孔法を用いた癌細胞と樹状細胞の融合法が抗腫瘍免疫誘導に有効であること報告されている。しかし、不活性化HVJはそれよりも再現性高くまた高効率に(PEGの数十倍)融合させることが可能であった。融合細胞をマウス皮下に1週間隔で2度免疫し10日後に脾細胞を取り出し、癌細胞で刺激したときに分泌されるIL-12を測定した。樹状細胞と癌細胞の混合したもので免疫したものよりも高いサイトカイン分泌を得た。融合細胞だけをソーティングしてもしなくてもサイトカイン分泌は変わらなかった。この融合細胞により癌の抗原の多くが提示されると考えられるが、その後でNaive T細胞を成熟させて細胞傷害性T細胞として機能させるため、アジュバンド作用のある物質が必要である。そこでCpGオリゴヌクレオチドを用いることにした。CpGオリゴヌクレオチドを融合細胞と混合したところ、CD80,CD86,MHC-class IIの発現でみられる樹状細胞の成熟がさらに増強され、IL-12,TNF-alphaの分泌もCpGオリゴヌクレオチドを用いない場合の2倍以上であった。そこでX線照射したマウスメラノーマとマウス樹状細胞の融合細胞をCpGオリゴヌクレオチドと混合してマウスに2度投与し、10日後に脾細胞を取り出してメラノーマに対する細胞傷害性T細胞の活性を測定したところ、CpGオリゴヌクレオチドの併用により著しい活性の増強をみた。しかしこの細胞傷害性T細胞は同じ系統のマウス異なる腫瘍であるリンフォーマ細胞EL4には反応しなかった。免疫後に腫瘍を移植したところこの方法により癌生着の完全抑制、高いマウス生存率(80%)が得られた。マウス腎癌細胞RENCAを用いた場合も同様のワクチン効果が得られた。腫瘍ができなかったマウスに再度同じ腫瘍を移植しても完全に拒絶がおこった。

Cancer antigen-associated genes are identified in cancer cells by PEG and electroporation, and anti-tumor immune induction by dendritic cell fusion. High reproducibility, high efficiency (dozens of times PEG), fusion is possible. The fusion cells were immunized subcutaneously at intervals of 1 week, and IL-12 was measured after spleen cells were extracted and stimulated by cancer cells. Dendritic cells are mixed with cancer cells, and the immune response is high. The fusion cell is divided into two parts. These fusion cells contain a large number of cancer antigens, which indicate that T cell maturation and cellular injury are necessary for T cell function. The first is to open the door. CpG is secreted by fusion cells, and the maturation of dendritic cells is enhanced. IL-12,TNF-alpha and CpG are secreted by fusion cells. In addition, CD80, CD86 and MHC-class II are produced by fusion cells. Therefore, the activity of cell-damaging T cells was measured after X-ray irradiation of fused cells of mausmauranna-mauranna-mauran Cell injury T cells in the same system After immunization, the tumor growth was completely suppressed and the survival rate was high (80%). RENCA It's the same thing.